プロテインキナーゼCおよび細胞内カルシウムは、未分化PC12細胞のノルエピネフリン輸送体を介してアンフェタミン媒介ドーパミン放出に必要です

未分化したPC12細胞におけるノルエピネフリンプラスマレム膜輸送体を介したアンフェタミン媒介ドーパミン放出におけるプロテインキナーゼCおよび細胞内Ca（2+）の役割を調査しました。選択的タンパク質キナーゼC阻害剤、キレリスリンは、1ミクロームアンフェタミンによって誘発された内因性ドーパミン放出を完全に阻害しました。プロテインキナーゼCの直接的な活性化は、CA（2+） - 鈍感でイミプラミン感受性の方法でドーパミン放出を増加させ、放出はアンフェタミンとの相加的ではありませんでした。これらのイベントは、細胞外Ca（2+）またはリセルピン前処理のいずれによっても変化しなかったため、エキソサイトーシスは関与しませんでした。長期のホルボールエステル処理によるプロテインキナーゼC活性のダウンレギュレーションは、[（3）H]ドーパミンの取り込みに明らかな影響を与えずに、アンフェタミン媒介ドーパミン放出の劇的な減少をもたらしました。Ca（2+）の役割をより完全に調べるために、細胞内Ca（2+）が細胞でキレート化されました。細胞内Ca（2+）の枯渇は、ビヒクル処理細胞と比較して1ミクロムアンフェタミンに応答してドーパミン放出を大幅に減少させましたが、[（3）]ドーパミンの摂取には影響しませんでした。したがって、我々の結果は、プラズマレム膜ノルエピネフリン輸送体を介したアンフェタミン媒介ドーパミン放出が、プロテインキナーゼC活性と細胞内Ca（2+）ではないが細胞内ではないが細胞内ではないことを示唆しています。さらに、プロテインキナーゼCおよび細胞内Ca（2+）は、PC12細胞におけるドーパミンのドーパミンを介したドーパミンを媒介するドーパミンの内向き輸送およびアンフェタミンを介した外向き輸送を調節するように見えます。

The role of protein kinase C and intracellular Ca(2+) on amphetamine-mediated dopamine release through the norepinephrine plasmalemmal transporter in undifferentiated PC12 cells was investigated. The selective protein kinase C inhibitor chelerythrine completely inhibited endogenous dopamine release elicited by 1 microM amphetamine. Direct activation of protein kinase C increased dopamine release in a Ca(2+)-insensitive, imipramine-sensitive manner and the release was not additive with amphetamine. Exocytosis was not involved since these events were not altered by either deletion of extracellular Ca(2+) or reserpine pretreatment. Down-regulation of protein kinase C activity by long-term phorbol ester treatment resulted in a dramatic decrease in amphetamine-mediated dopamine release with no apparent effect on [(3)H]dopamine uptake. To more completely examine a role for Ca(2+), intracellular Ca(2+) was chelated in the cells. Depletion of intracellular Ca(2+) considerably decreased dopamine release in response to 1 microM amphetamine compared with vehicle-treated cells, but had no effect on the [(3)H]dopamine uptake. Thus, our results suggest that amphetamine-mediated dopamine release through the plasmalemmal norepinephrine transporter is highly dependent on protein kinase C activity and intracellular but not extracellular Ca(2+). Furthermore, protein kinase C and intracellular Ca(2+) appear to regulate [(3)H]dopamine inward transport and amphetamine-mediated outward transport of dopamine independently in PC12 cells.