メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（MTHFR）の1298A-> C多型：ホモシステインとのin vitro発現と関連性

メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ（MTHFR）、677C-> Tは、血管疾患の危険因子である酵素活性の低下、熱電子酵素、および軽度の高ホモサチタイン血症の一般的な変異です。最近、2番目の一般的な突然変異（1298a-> c;グルタミン酸からアラニン）が報告されましたが、この突然変異は、BP677バリアントを運んだ個人でのみホモシステインを増加させることが示唆されました。この突然変異の機能的結果を評価するために、部位指向の突然変異誘発とin vitro発現を実行しました。臨床的影響のin vivo評価のために、677の代替について以前に評価されていたNHLBIファミリー心臓研究の198人の個人における1298A-> C遺伝子型と血漿ホモシステインを調べました。ヒトcDNAの部位指向変異誘発を実施して、2つの変異のそれぞれを含む酵素と、両方の置換を含む酵素を生成しました。酵素活性と熱可可能は、細菌抽出物で評価されました。野生型cDNAの活性は100％と呼ばれました。1298と677の変異を個別に含む変異酵素は、それぞれ68％（+/- 5.0）と45％（+/- 10.8）を対照活性のものでしたが、両方の変異を含む酵素のコントロールは41％（+/- 12.8）でした。活動。1298変異は、熱電酵素と関連していませんでした。家族の心臓研究では、677c-> tバリアントのみを運んだ個人と比較して、両方の置換に対してヘテロ接合体の断食性ホモシステインは有意に高かった（p <0.05）。この研究は、MTHFRの2つのバリアントを高ホモサチン血症の遺伝的危険因子として評価する必要があることを示唆しています。

A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR), 677C-->T, is associated with reduced enzyme activity, a thermolabile enzyme and mild hyperhomocysteinemia, a risk factor for vascular disease. Recently, a second common mutation (1298A-->C; glutamate to alanine) was reported, but this mutation was suggested to increase homocysteine only in individuals who carried the bp677 variant. To evaluate the functional consequences of this mutation, we performed site-directed mutagenesis and in vitro expression. For in vivo assessment of clinical impact, we examined the 1298A-->C genotypes and plasma homocysteine in 198 individuals from the NHLBI Family Heart Study that had previously been assessed for the 677 substitution. Site-directed mutagenesis of the human cDNA was performed to generate enzymes containing each of the two mutations, as well as an enzyme containing both substitutions. Enzyme activity and thermolability were assessed in bacterial extracts. The activity of the wild-type cDNA was designated as 100%; mutant enzymes containing the 1298 and 677 mutations separately had 68% (+/-5.0) and 45% (+/-10.8), respectively, of control activity while the enzyme containing both mutations had 41% (+/-12.8) of control activity. The 1298 mutation was not associated with a thermolabile enzyme. In the Family Heart Study, fasting homocysteine was significantly higher (P<0.05) in individuals heterozygous for both substitutions, compared to individuals who carried only the 677C-->T variant. This study suggests that two variants in MTHFR should be assessed as genetic risk factors for hyperhomocysteinemia.