リプレッサーの抑制：シロイヌナズナのRGAタンパク質のギベレリンによる急速な減少

RGA（Ga1-3のリプレッサー用）およびSpindly（Spy）は、劣性RGAとSpyの変異がGA欠損変異体Ga1-3の表現型を部分的に抑制したため、シロイヌナズナのギベレリン（GA）シグナル伝達の抑制者である可能性があります。RGAもSpyも、野生型またはGA1-3のバックグラウンドのGAレベルを変更しなかったことがわかりました。しかし、GA生合成遺伝子Ga4の発現はRGA変異によって26％減少し、RGAによるGA応答経路の部分的な抑制抑制によりGa4発現のフィードバック阻害がもたらされることを示唆しています。緑色の蛍光タンパク質（GFP）-RGA融合タンパク質は、トランスジェニックシロイヌナズナの核に局在していました。この結果は、配列分析に基づく転写調節因子としてのRGAの予測機能をサポートします。共焦点顕微鏡検査と免疫ブロット分析により、GFP-RGA融合タンパク質と内因性RGAの両方のレベルがGA処理により急速に減少することが示されました。したがって、GA信号は、リプレッサータンパク質RGAを分解することにより、GAシグナル伝達経路を抑制するように見えます。GA4遺伝子発現に対するRGAの効果とRGAタンパク質レベルに対するGAの効果により、GA恒常性が達成されるメカニズムの一部を特定することができます。

RGA (for repressor of ga1-3) and SPINDLY (SPY) are likely repressors of gibberellin (GA) signaling in Arabidopsis because the recessive rga and spy mutations partially suppressed the phenotype of the GA-deficient mutant ga1-3. We found that neither rga nor spy altered the GA levels in the wild-type or the ga1-3 background. However, expression of the GA biosynthetic gene GA4 was reduced 26% by the rga mutation, suggesting that partial derepression of the GA response pathway by rga resulted in the feedback inhibition of GA4 expression. The green fluorescent protein (GFP)-RGA fusion protein was localized to nuclei in transgenic Arabidopsis. This result supports the predicted function of RGA as a transcriptional regulator based on sequence analysis. Confocal microscopy and immunoblot analyses demonstrated that the levels of both the GFP-RGA fusion protein and endogenous RGA were reduced rapidly by GA treatment. Therefore, the GA signal appears to derepress the GA signaling pathway by degrading the repressor protein RGA. The effect of rga on GA4 gene expression and the effect of GA on RGA protein level allow us to identify part of the mechanism by which GA homeostasis is achieved.