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精製されたタンパク質は、分子、免疫学、細胞研究に必須です。ただし、複雑な混合物からのタンパク質の精製には、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（FPLC）または高性能液体クロマトグラフィ（HPLC）システムを使用して、特殊なクロマトグラフィー方法（つまり、ゲルろ過、イオン交換など）が必要です。このようなシステムは高価であり、特定のタンパク質は十分な純度のために2つ以上の異なるステップを必要とし、一般的に回復が低くなります。この研究の目的は、基本的で容易に入手可能な実験装置を使用して、迅速で安価で効率的なゲル電気泳動ベースのタンパク質精製法を開発することでした。私たちは、モデルタンパク質候補として主要なアレルゲンLOL P 1とLOL P 5を浄化するために、粗甲虫の花粉抽出物を使用しました。総タンパク質は、大きな一次ゲルで分解され、クーマシーブリリアントブルー（CBB）染色されたLOL P 1/5アレルゲンを切除し、二次「ミニ」ゲルで精製しました。精製されたタンパク質を、染色されていない分離ゲルから抽出し、ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）および免疫ブロット分析に供給しました。銀染色されたSDS-PAGEゲルは、純粋なタンパク質を分離しました（すなわち、8mgの粗出発材料から回収された875 lol p 1のマイクログ）。免疫ブロット分析により、精製タンパク質の免疫学的反応性が確認されました。このような精製方法は、モノクローナル抗体（MAB）産生、タンパク質配列決定、一般的な分子、免疫学、および細胞研究で使用するのに十分な純度のタンパク質を生成するのに迅速で安価で効率的です。
精製されたタンパク質は、分子、免疫学、細胞研究に必須です。ただし、複雑な混合物からのタンパク質の精製には、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（FPLC）または高性能液体クロマトグラフィ（HPLC）システムを使用して、特殊なクロマトグラフィー方法（つまり、ゲルろ過、イオン交換など）が必要です。このようなシステムは高価であり、特定のタンパク質は十分な純度のために2つ以上の異なるステップを必要とし、一般的に回復が低くなります。この研究の目的は、基本的で容易に入手可能な実験装置を使用して、迅速で安価で効率的なゲル電気泳動ベースのタンパク質精製法を開発することでした。私たちは、モデルタンパク質候補として主要なアレルゲンLOL P 1とLOL P 5を浄化するために、粗甲虫の花粉抽出物を使用しました。総タンパク質は、大きな一次ゲルで分解され、クーマシーブリリアントブルー（CBB）染色されたLOL P 1/5アレルゲンを切除し、二次「ミニ」ゲルで精製しました。精製されたタンパク質を、染色されていない分離ゲルから抽出し、ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）および免疫ブロット分析に供給しました。銀染色されたSDS-PAGEゲルは、純粋なタンパク質を分離しました（すなわち、8mgの粗出発材料から回収された875 lol p 1のマイクログ）。免疫ブロット分析により、精製タンパク質の免疫学的反応性が確認されました。このような精製方法は、モノクローナル抗体（MAB）産生、タンパク質配列決定、一般的な分子、免疫学、および細胞研究で使用するのに十分な純度のタンパク質を生成するのに迅速で安価で効率的です。
Purified proteins are mandatory for molecular, immunological and cellular studies. However, purification of proteins from complex mixtures requires specialised chromatography methods (i.e., gel filtration, ion exchange, etc.) using fast protein liquid chromatography (FPLC) or high-performance liquid chromatography (HPLC) systems. Such systems are expensive and certain proteins require two or more different steps for sufficient purity and generally result in low recovery. The aim of this study was to develop a rapid, inexpensive and efficient gel-electrophoresis-based protein purification method using basic and readily available laboratory equipment. We have used crude rye grass pollen extract to purify the major allergens Lol p 1 and Lol p 5 as the model protein candidates. Total proteins were resolved on large primary gel and Coomassie Brilliant Blue (CBB)-stained Lol p 1/5 allergens were excised and purified on a secondary "mini"-gel. Purified proteins were extracted from unstained separating gels and subjected to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblot analyses. Silver-stained SDS-PAGE gels resolved pure proteins (i.e., 875 microg of Lol p 1 recovered from a 8 mg crude starting material) while immunoblot analysis confirmed immunological reactivity of the purified proteins. Such a purification method is rapid, inexpensive, and efficient in generating proteins of sufficient purity for use in monoclonal antibody (mAb) production, protein sequencing and general molecular, immunological, and cellular studies.
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