機能性ベータ2-アドレナリン作動性受容体は、ガービルco牛の外側壁の非建物組織に存在します

最近、機能性ベータ1-アドレナリン受容体が血管筋膜における支配的なベータアドレナリン受容体サブタイプであり、ベータ1-アドレナリン作動性受容体が海綿縁細胞のK+分泌を刺激することを実証しました。本研究の目標は、co牛の外側壁の非建物組織にベータアドレナリン作動性受容体が含まれているかどうか、もしそうなら、どのサブタイプが存在するかを判断することでした。薬理学的ツールを使用して、cAMPの生産が測定された機能的研究で受容体を特定しました。さらに、受容体は、逆トランスクリわ角ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）産物のクローニングと配列決定により転写産物として同定されました。実験は、ガービルの非建物の外側壁組織で行われました。10（-5）mイソプロテレノールで刺激された組織は、12分以内に耳ごとに0.42 +/- 0.22 pmol cAMPを生成しました（n = 14）。選択的ベータアドレナリン作動性受容体アゴニストイソプロテレノールは、（2 +/- 3）x 10（-7）m（n = 7）のEC50でcAMP産生を刺激しました。イソプロテレノール刺激cAMP産生は、（7 +/- 7）x 10（-6）mのIC50を持つベータ2アドレナリン受容体拮抗薬ICI 118551によって阻害されました。イソプロテレノール刺激cAMP産生は、高度に選択的なBeta1-アドレナリン受容体拮抗薬CGP 20712aによって阻害されませんでした。CGP 20712AのIC50とアフィニティ定数は、それぞれ> 3 x 10（-4）および> 6 x 10（-6）mと推定されました。Beta1-、Beta2-アドレナリン受容体に特異的なプライマーを使用して非建物の外側壁組織から分離された総RNAのRT-PCRは、Beta1-およびBeta2-の予測サイズの産物を明らかにしましたが、Beta3-subtypeではありませんでした。配列分析により、増幅されたcDNAフラグメントが遺伝子特異的ヌクレオチド配列をコードしたことが確認されました。これらの結果は、非建物の外側壁組織がベータ1およびベータ2の転写産物を含むことを示していますが、ベータ3アドレナリン受容体のためではなく、ベータ2アドレナリン受容体が支配的な機能受容体サブタイプであることを示しています。Beta2-アドレナリン受容体の細胞局在と機能はまだ決定されていません。

Recently, we have demonstrated that functional beta1-adrenergic receptors are the dominant beta-adrenergic receptor subtype in the stria vascularis and that beta1-adrenergic receptors stimulate K+ secretion in strial marginal cells. The goal of the present study was to determine whether nonstrial tissues in the cochlear lateral wall contain beta-adrenergic receptors and if so which subtype is present. Pharmacological tools were used to identify receptors in functional studies where cAMP production was measured. Further, receptors were identified as transcripts by cloning and sequencing of reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) products. Experiments were performed on gerbil nonstrial lateral wall tissues. Tissues stimulated with 10(-5) M isoproterenol produced 0.42 +/- 0.22 pmol cAMP per ear within 12 min (n = 14). The selective beta-adrenergic receptor agonist isoproterenol stimulated cAMP production with an EC50 of (2 +/- 3) x 10(-7) M (n = 7). Isoproterenol-stimulated cAMP production was inhibited by the beta2-adrenergic receptor antagonist ICI 118551 with an IC50 of (7 +/- 7) x 10(-6) M, which corresponds to an affinity constant of 1 x 10(-7) M (pK(DB) = 6.89 +/- 0.23, n = 3). Isoproterenol-stimulated cAMP production was not inhibited by the highly selective beta1-adrenergic receptor antagonist CGP 20712A. The IC50 and the affinity constant for CGP 20712A were estimated to be >3 x 10(-4) and >6 x 10(-6) M, respectively. RT-PCR of total RNA isolated from nonstrial lateral wall tissues using primers specific for beta1-, beta2- and beta3-adrenergic receptors revealed products of the predicted sizes for the beta1- and beta2- but not for the beta3-subtype. Sequence analysis confirmed that amplified cDNA fragments encoded gene-specific nucleotide sequences. These results demonstrate that nonstrial lateral wall tissues contain transcripts for beta1- and beta2- but not for beta3-adrenergic receptors and that the beta2-adrenergic receptor is the dominant functional receptor subtype. The cellular localization and function of the beta2-adrenergic receptors remains to be determined.