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私たちは、in vitroで成熟し、受精した胚盤胞に由来する栄養芽細胞株株であるウシ栄養芽細胞-1（BT-1）を確立しました。いくつかの栄養芽細胞株は以前にフィーダー細胞を使用して報告されていますが、BT-1はフィーダー細胞の非存在下で培養できます。BT-1は、ウシ子宮内膜線維芽細胞条件の培地（線維芽細胞条件付き培地）を使用して、フィーダー細胞の非存在下で18か月以上（75回以上）培養されました。細胞の成長は、線維芽細胞条件の培地で加速されていることがわかりました。ブロモデオキシウリジンの取り込み分析では、線維芽細胞条件培地のBT-1細胞の成長率は、従来の培地のそれよりも2倍高い。さらに、線維芽細胞条件の培地は、めっき後の培養皿にBT-1細胞の付着を加速しました。BT-1は上皮形態を示し、サイトケラチンを発現しました。連続培養中、細胞は細胞シートの下に液体を蓄積し、最終的に自由浮遊小胞に変換されるドームのような構造を形成しました。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応分析と免疫ブロット分析により、BT-1細胞がインターフェロンタウと胎盤乳酸（PL）を発現することが示されました。免疫蛍光分析により、少数の細胞がPL陽性であり、これらの細胞が二核であることが実証されました。BT-1栄養芽細胞株は、栄養芽層細胞系統と増殖の研究のための強力なモデルシステムとして機能します。
私たちは、in vitroで成熟し、受精した胚盤胞に由来する栄養芽細胞株株であるウシ栄養芽細胞-1（BT-1）を確立しました。いくつかの栄養芽細胞株は以前にフィーダー細胞を使用して報告されていますが、BT-1はフィーダー細胞の非存在下で培養できます。BT-1は、ウシ子宮内膜線維芽細胞条件の培地（線維芽細胞条件付き培地）を使用して、フィーダー細胞の非存在下で18か月以上（75回以上）培養されました。細胞の成長は、線維芽細胞条件の培地で加速されていることがわかりました。ブロモデオキシウリジンの取り込み分析では、線維芽細胞条件培地のBT-1細胞の成長率は、従来の培地のそれよりも2倍高い。さらに、線維芽細胞条件の培地は、めっき後の培養皿にBT-1細胞の付着を加速しました。BT-1は上皮形態を示し、サイトケラチンを発現しました。連続培養中、細胞は細胞シートの下に液体を蓄積し、最終的に自由浮遊小胞に変換されるドームのような構造を形成しました。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応分析と免疫ブロット分析により、BT-1細胞がインターフェロンタウと胎盤乳酸（PL）を発現することが示されました。免疫蛍光分析により、少数の細胞がPL陽性であり、これらの細胞が二核であることが実証されました。BT-1栄養芽細胞株は、栄養芽層細胞系統と増殖の研究のための強力なモデルシステムとして機能します。
We established a trophoblastic cell line, bovine trophoblast-1 (BT-1), derived from in vitro matured and fertilized blastocyst. While several trophoblastic cell lines have been previously reported using feeder cell, BT-1 could be cultured in the absence of feeder cell. BT-1 was cultured for more than 18 months (over 75 passage) in the absence of feeder cells, using bovine endometrial fibroblast-conditioned medium (fibroblast-conditioned medium). We found that the cell growth was accelerated in fibroblast-conditioned medium. In bromodeoxyuridine incorporation analysis, BT-1 cells growth rate in fibroblast-conditioned medium was about two-fold higher than that in conventional medium. Furthermore, fibroblast-conditioned medium accelerated attachment of BT-1 cells to culture dishes following plating. BT-1 showed epithelial morphology and expressed cytokeratin. During continuous culture, cells accumulated fluid under the cell sheet and form dome-like structure that eventually transformed into free floating vesicles. Reverse transcription polymerase chain reaction analysis and immunoblot analysis demonstrated that BT-1 cells expressed interferon-tau as well as placental lactogen (PL). Immunofluorescence analysis demonstrated that a small number of cells were PL-positive, and these cells were binucleate. The BT-1 trophoblastic cell line could serve as a powerful model system for the study of trophoblast cell lineage and proliferation.
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