前核移植リボ核酸における修飾ヌクレオシン7-メチルグアノシン、リボチミジン、および2-チオメチル-N6-（イソペンテニル）アデノシンの機能

タンパク質合成におけるリボ核酸（TRNA）修飾の微妙な機能を解明するために、特定の位置での修飾が異なるTRNAのペアを亜ティリスから調製しました。TRNAは、アンチコドンループ、余分なアーム、およびTUCループの変更が異なります。これらの種の機能特性は、プログラムされたリボソームで、アミノアシル化、および開始およびペプチド結合形成で比較されました。これらの実験では、以下を示しました。（I）TRNA（F）（Met）では、大腸菌由来の7-メチルグアノシン形成酵素による余分な腕のグアノシン46のメチル化は、B。subtilisメチオニル-TRNAシンセターゼのアミノアシル化速度を変化させます。繰り返し実験では、V（最大）値は半分減少します。（ii）54位（RT54）のリボチミジンを含むTRNA（F）（MET）54（U54）の位置でのウリジンの種は、未処理またはトリメトプリム処理B. subtilisから得られました。それぞれU54とRT54を備えたホルミール化されたFMET-TRNA（F）（MET）種は、AUG、開始因子、および70Sリボソームを含むin vitro開始システムでそれぞれ同等に機能します。ただし、非フォーメーションMet-TRNA（T）（MET）種は互いに異なります。「Met-TRNA（F）（Met）RT」は非アクティブですが、U54カウンターアップアートは発生複合体を効果的に形成します。（iii）B. subtilisから入手した2つの等容器、tRNA（1）（PHE）とtRNA（2）（PHE）が入手されました。TRNA（1）（PHE）は特別な成長条件下でのみ蓄積し、不完全に修正された前駆体（2）（PHE）です。アンチコドンの最初の位置では、グアノシンはGMを置き換え、アンチコドンの3 '端の隣に置き換えます（イソペンテニル）アデノシンは、2-チオメチル-N（6） - （イソペンテニル）アデノシンに置き換えます。両方のtRNAは、アミノアシル化速度論で同じように行動します。FMET-PHEの因子依存性AUGU（3）指向の形成では、不十分なTRNA（1）（PHE）は、成熟した対応物よりも5〜15 mMのMg（2+）濃度では常に効率が低くなります。

To elucidate subtle functions of transfer ribonucleic acid (tRNA) modifications in protein synthesis, pairs of tRNA's that differ in modifications at specific positions were prepared from Bacillus subtilis. The tRNA's differ in modifications in the anticodon loop, the extra arm, and the TUC loop. The functional properties of these species were compared in aminoacylation, as well as in initiation and peptide bond formation, at programmed ribosomes. These experiments demonstrated the following. (i) In tRNA(f) (Met) the methylation of guanosine 46 in the extra arm to 7-methylguanosine by the 7-methylguanosine-forming enzyme from Escherichia coli changes the aminoacylation kinetics for the B. subtilis methionyl-tRNA synthetase. In repeated experiments the V(max) value is decreased by one-half. (ii) tRNA(f) (Met) species with ribothymidine at position 54 (rT54) or uridine at position 54 (U54) were obtained from untreated or trimethoprim-treated B. subtilis. The formylated fMet-tRNA(f) (Met) species with U54 and rT54, respectively, function equally well in an in vitro initiation system containing AUG, initiation factors, and 70s ribosomes. The unformylated Met-tRNA(t) (Met) species, however, differ from each other: "Met-tRNA(f) (Met) rT" is inactive, whereas the U54 counter-upart effectively forms the initiation complex. (iii) Two isoacceptors, tRNA(1) (Phe) and tRNA(2) (Phe), were obtained from B. subtilis. tRNA(1) (Phe) accumulates only under special growth conditions and is an incompletely modified precursor oftRNA(2) (Phe): in the first position of the anticodon, guanosine replaces Gm, and next to the 3' end of the anticodon (isopentenyl)adenosine replaces 2-thiomethyl-N(6)-(isopentenyl)adenosine. Both tRNA's behave identically in aminoacylation kinetics. In the factor-dependent AUGU(3)-directed formation of fMet-Phe, the undermodified tRNA(1) (Phe) is always less efficient at Mg(2+) concentrations between 5 and 15 mM than its mature counterpart.