マウス施肥における精子特異的組換え避妊ワクチンゲン（RCV）に対する抗体の効果：動物モデルを検索して、その避妊の可能性を調べる

最近、ヒト精巣から避妊ワクチンゲン（RCV）として指定された精子特異的抗原をクローニングして配列決定しました（Naz et al。、2001）。本研究は、マウスがその免疫環境効果を調べるための適切なモデルを提供できるかどうかを調べるために、マウスの精子におけるそのプロテオームのホモログと機能を調べるために実施されました。これは、約44 kdの組換え（R）ヒトCV抗原に対して上昇した精製抗体（AB）を使用して調べました。ウエスタンブロット手順では、RCV抗体は、マウス精巣およびマウス精子抽出物で約64 +/- 5 kDの特定のタンパク質バンドを認識しました。これは、ヒト精巣およびヒト精子で見られるバンドと同様のバンドです。免疫沈降手順では、RCV AB免疫沈降は、マウスの精子とマウス精巣抽出物から同様のサイズのタンパク質バンドを沈殿させました。免疫細胞化学（ICT）、免疫透視電子顕微鏡（ISEM）、および免疫補償技術（IBT）は、非嚢胞性および触媒されたマウススペルム細胞の先クロソームおよび尾部領域のCV抗原の細胞内局在を明らかにしました。機能的バイオアッセイでは、RCV ABはin vitroでの精子結合と同様に先体の反応を阻害しました。これらのデータは、CV抗原がマウスの精子で発現し、精子機能と精子卵結合に生物学的役割を持っていることを示しています。容量化/先体反応と精子ゾーナ結合のin vitro阻害は、マウスが、活発に免疫された動物におけるCV抗原の免疫抑制効果を調べるための適切なモデルを提供できることを示唆しています。

Recently, we cloned and sequenced a sperm-specific antigen, designated as Contraceptive Vaccinogen (rCV), from human testis (Naz et al., 2001). The present study was conducted to examine its proteomic homologue and function in murine sperm, in order to find out whether or not the mouse can provide a suitable model for examining its immunocontraceptive effects. This was examined by using purified antibodies (Ab) raised against the recombinant (r) human CV antigen of approximately 44 kD. In the Western blot procedure, rCV antibodies recognized a specific protein band of approximately 64 +/- 5 kD in murine testis and murine sperm extracts, the band similar to that found in human testis and human sperm. In the immunoprecipitation procedure, rCV Ab immunoprecipitated a protein band of similar size from murine sperm and murine testis extracts. The immunocytochemical (ICT), immunoscanning electronmicroscopic (ISEM) and the immunobead binding technique (IBT) revealed the subcellular localization of CV antigen on the surface of acrosome and tail regions of the noncapacitated and capacitated murine sperm cell. In functional bioassays, rCV Ab inhibited the acrosome reaction as well as sperm-egg binding in vitro. These data indicate that the CV antigen is expressed in murine sperm and has a biological role in sperm function and sperm-egg binding. In vitro inhibition of capacitation/acrosome reaction and sperm-zona binding suggest that the mouse can provide a suitable model to examine the immunocontraceptive effects of CV antigen in actively-immunized animals.