治癒傷における一酸化窒素：時間コースの研究

はじめに：癒しの傷における一酸化窒素発現の時間経過とその合成の原因となる細胞集団を研究しました。 方法：24個のルイスラットは、ポリビニルアルコールスポンジの皮下移植を受けました。負傷後、1、3、5、7、10、14、および35日目に3人のグループでラットを犠牲にしました。収穫されたスポンジにおけるN（G）-l-モノモチル - アルギニン（L-NMMA）の有無にかかわらず、3H標識アルギニンから3H溶解シトルリンへの変換を測定しました。血漿および創傷液中の硝酸塩/亜硝酸塩（NOx）は、グレイス反応によって定量化されました。誘導性一酸化窒素シンターゼ（INOS）遺伝子発現は、北部分析と逆転写酵素 - ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）によって決定されました。誘導性NOSは、デュアルラベルフローサイトメトリーにより、特定の創傷細胞集団で同定されました。 結果：負傷後24時間後に一酸化窒素シンターゼ（NOS）活性がピークに達し（ミリグラムスポンジあたり37.7 +/- 0.9マイクロモールシトルリン）、その後着実に低下しました。L-NMMAによるNOS活性の阻害率は、1〜7日目（70〜80％）で最も高かった。これは10日目までに50％に減少し、14〜35日目までに25％に減少しました。INOS遺伝子発現は、NOS生化学的活性に並行していました。RT-PCRは、負傷後10日まで低レベルの発現を確認しました。プラズマNOxレベルは、wunding式後の期間を通じて22.6 +/- 1.3から29.3 +/- 1.5 microMの狭い範囲内で残り、創傷液（MicroM）の対応するレベルは1日目の27 +/- 3.8から107.2 +//に着実に増加しました。-14日目。14日目。誘導性NOS発現は、創傷マクロファージの蛍光活性化細胞ソーティングによって、傷を負傷した後の1日目と3日目に検出できました。 結論：我々の発見は、皮膚創傷治癒の初期の最大NOS活動を示唆しており、負傷後10日までの生産が持続しています。NOS生化学的活性は、INOS遺伝子発現と並行しています。血漿NOXは一定のままでしたが、創傷液NOXは14日目に着実にピークに増加しました。創傷マクロファージは、創傷治癒の初期段階で一酸化窒素生産の源であるように見えます。

INTRODUCTION: We studied the time course of nitric oxide expression in the healing wound and the cell populations responsible for its synthesis. METHODS: Twenty four Lewis rats underwent subcutaneous implantation of polyvinyl alcohol sponges. Rats were sacrificed in groups of three on days 1, 3, 5, 7, 10, 14, and 35 after wounding. The conversion of 3H-labeled arginine to 3H-labeled citrulline, with or without N(G)-L-monomethyl-arginine (L-NMMA) in harvested sponges, was measured. Nitrate/nitrite (NOx) in plasma and wound fluid was quantified by Greiss reaction. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene expression was determined by Northern analysis and reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Inducible NOS was identified in specific wound cell populations by dual-label flow cytometry. RESULTS: Nitric oxide synthase (NOS) activity peaked at 24 h after wounding (37.7 +/- 0.9 micromol citrulline per milligram sponge), with a steady decline thereafter. Percentage inhibition of NOS activity by l-NMMA was highest on days 1-7 (70-80%). This declined to 50% by day 10 and to 25% by days 14-35. The iNOS gene expression paralleled NOS biochemical activity. RT-PCR confirmed low-level expression up to 10 days after wounding. Plasma NOx levels remained within a narrow range of 22.6 +/- 1.3 to 29.3 +/- 1.5 microM throughout the postwounding period, while corresponding levels in wound fluid (microM) increased steadily from 27 +/- 3.8 on day 1 to 107.2 +/- 10.0 on day 14. Inducible NOS expression was detectable by fluorescence-activated cell sorting in wound macrophages on days 1 and 3 after wounding. CONCLUSIONS: Our findings suggest maximal NOS activity early in cutaneous wound healing, with sustained production up to 10 days after wounding. NOS biochemical activity was paralleled by iNOS gene expression. Plasma NOx remained constant, while wound fluid NOx increased steadily to peak at day 14. Wound macrophages appear to be a source of nitric oxide production in the early phase of wound healing.