ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ-9のバキュロウイルス発現触媒ドメインの構造、発現、および特性評価

ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ-9（MMP-9）のミニ酵素型のDNA構造、バチュロウイルス発現、および部分的な特性を報告します。MMP-9のpre、pro、および触媒ドメインからなるMMP-9ミニザイム遺伝子コンストラクトは、バキュロウイルス発現システムを使用してSF9昆虫細胞に導入されました。組換えMMP-9ミニ酵素の発現は、細胞培地の約0.8 mg/Lであると推定されました。組換えタンパク質は、単一ステップのゼラチン - セファロース親和性カラムを使用して精製し、ゼラチノ分解活性を備えた非常に安定した活性ミニ酵素を生成しました。さらに、ヘパリンとTIMP-1とのMMP-9の相互作用に関連する2つの興味深い発見は、私たちの研究から生じました。第一に、ヒトMMP-9のProおよび触媒ドメインは、ヘパリンの親和性には十分ではありません。第二に、一般的なコンセンサスとは対照的に、MMP-9の酵素活性のTIMP-1遮断は、そのMMP-9タンパク質基質のC末端への事前の結合を必要としません。

We report DNA construction, baculovirus expression, and partial characterization of a minienzyme form of the human matrix metalloproteinase-9 (MMP-9). The MMP-9 minienzyme gene construct consisting of the pre, pro, and catalytic domains of the MMP-9 was introduced into Sf9 insect cells using a baculovirus expression system. The expression of the recombinant MMP-9 minienzyme was estimated to be approximately 0.8 mg/L of cell medium. The recombinant protein was purified using a single-step gelatin-Sepharose affinity column and yielded a highly stable and active minienzyme with gelatinolytic activity. Moreover, two interesting findings related to MMP-9 interactions with heparin and TIMP-1 resulted from our studies. First, the pro and catalytic domains of the human MMP-9 are not sufficient for heparin affinity. Second, in contrast to the prevailing consensus, TIMP-1 blockade of the enzymatic activity of MMP-9 does not require prior binding to the C-terminus of its MMP-9 protein substrate.