神経線維腫症タイプ1（NF1）遺伝子の変異分析のための変性高性能液クロマトグラフィ（DHPLC）の評価

1型神経線維腫症（NF1）を引き起こすNF1遺伝子の変異の同定は、遺伝子のサイズが大きく、有意な突然変異クラスタリングの欠如、基礎となる病変病変の多様性、NF1 pseudogenesの存在のためにかなりの課題を提示しています。高性能液体クロマトグラフィー（DHPLC）は、高スループット、非耐性、および大部分が自動化されたヘテロドゥプレックスベースの技術である、多くの点でこの状態での突然変異検出に理想的な方法で適しています。したがって、DHPLCは、NF1患者における60のエクソンとNF1遺伝子のスプライス接合部の迅速なスクリーニングのために最適化されました。DHPLCの感度は、既知の生殖細胞変異を有する111人の無関係なNF1患者のコホートの遡及的研究で評価されました。変異の97％が検出されました。その後の60人の無関係なNF1患者の前向き分析では、34人の個人（68％）で生殖細胞変異が確認され、これらの変化のうち22は新規です。これは、NF1遺伝子についてこれまでに報告された最高の突然変異検出率を表し、単一のスクリーニング技術とゲノムDNAを標的として示しています。

The identification of mutations in the NF1 gene causing type 1 neurofibromatosis (NF1) has presented a considerable challenge because of the large size of the gene, the lack of significant mutational clustering, the diversity of the underlying pathological lesions and the presence of NF1 pseudogenes. Denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC), a high throughput, non-hazardous and largely automated heteroduplex-based technique, is in many ways ideally suited to mutation detection in this condition. DHPLC was therefore optimised for the rapid screening of the 60 exons and splice junctions of the NF1 gene in patients with NF1. The sensitivity of DHPLC was evaluated in a retrospective study of a cohort of 111 unrelated NF1 patients with known germline mutations; 97% of mutations were detected. In a subsequent prospective analysis of 50 unrelated NF1 patients, germline mutations were identified in 34 individuals (68%), 22 of these alterations being novel. This represents the highest rate of mutation detection so far reported for the NF1 gene with a single screening technique and genomic DNA as a target.