[モノクローナル抗体Mgb1のファージ変形したシングルチェーン可変フラグメントの産生]

目的：癌に向けられたモノクローナル抗体MGB1の単一鎖可変フラグメント（SCFV）を生成することにより、胃癌の診断と治療に関するin vivo研究用の腫瘍標的媒体を取得するための基礎を築くこと。 方法：mRNAをMGB1産生マウスハイブリドーマ細胞株から分離し、重い鎖cDNAの可変領域を個別に増幅し、PCRによって特別に構築されたリンカーDNAを使用してSCFV DNAに組み立てました。SCFV DNAをファゲミドベクターPCANTAB5Eに連結し、結晶サンプルを有能な大腸菌TG1に変換しました。形質転換細胞にM13KO7ヘルパーファージを感染させて、ファージM13の先端に遺伝子3タンパク質の融合としてSCFVフラグメントを示す組換えファージを生成しました。胃癌細胞株で2ラウンドのパンをした後、Kato IIIはMGB1結合抗原を高度に発現した後、抗体のSCFV断片を酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）によって濃縮したファージの酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）によって選択しました。正のファージクローンの親和性は、競合ELISAによって検出されました。 結果：VH、VL、およびSCFV DNAは、それぞれ約340 bp、320 bp、750 bpでした。17のファージクローンは、40の濃縮ファージクローンから選択されたMgb1のSCFVを表示しました。17のファージクローンのうち4は、カトイイ細胞で発現した抗原に結合するために、元のハイブリドーマ抗体MGB1と強く競合する可能性があります。 結論：モノクローナル抗体Mgb1のファージ変形SCFVフラグメントは、ファージ抗体技術によって成功裏に産生されます。これは、抗体の適用範囲を広げるのに役立ちます。

OBJECTIVE: To lay a foundation for obtaining a tumor-targeting vehicle for in vivo study on diagnosis and treatment of gastric carcinoma by generating single chain variable fragments (ScFv) of monoclonal antibody MGb1 directed against the cancer. METHODS: mRNA was isolated from MGb1-producing mouse hybridoma cell line, and the variable regions of heavy and light chain cDNAs were amplified separately and assembled into ScFv DNAs with a specially constructed linker DNA by PCR. The ScFv DNAs were ligated into the phagemid vector pCANTAB5E and the ligated sample was transformed into competent E. coli TG1. The transformed cells were infected with M13KO7 helper phage to yield recombinant phage, which display ScFv fragments as a fusion with gene 3 protein on the tips of the phage M13. After two rounds of panning with gastric carcinoma cell line KATO III highly expressing MGb1-binding antigen, the phage clones displayed ScFv fragments of the antibody were selected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from the enriched phages. The affinity of the positive phage clones was detected by competition ELISA. RESULTS: The VH, VL and ScFv DNAs were about 340 bp, 320 bp and 750 bp respectively. 17 phage clones displayed ScFv of MGb1 were selected from 40 enriched phage clones. 4 out of the 17 phage clones could strongly compete with the original hybridoma antibody MGb1 for binding to the antigen expressed on KATOIII cells. CONCLUSION: The phage-displayed ScFv fragments of monoclonal antibody MGb1 are successfully produced by phage antibody technology, which may be useful to widen the range of application of the antibody.