マウスでのコドン改善CREリコンビナーゼ（ICRE）発現

哺乳類コドンの使用をCREリコンビナーゼに適用することにより、3つの異なる哺乳類細胞株で免疫ブロットと機能分析によって決定されるように、CRE発現を改善しました。改良されたCRE（ICRE）遺伝子は、原核生物のコード配列の高いCPG含有量を減らし、哺乳類のエピジェネティックなサイレンシングの可能性を減らすように設計されました。マウスを発現するトランスジェニックICREは良好な頻度で得られ、これらのマウスでは、ICREを発現するすべての細胞でLOXPを介したDNA組換えが観察されました。さらに、CRE活性の時間制御のために2つのエストロゲン受容体ホルモン結合ドメインに融合したICREは、トランスジェニックマウスでも発現できます。しかし、タモキシフェンの投与後のCRE誘導は、CRE活性が低いだけで得られました。したがって、脳内のCre Fusionタンパク質の効率的な活性化にはさらなる改善が必要なのに対し、我々の研究は、ICREがマウスの遺伝実験を促進するべきであることを示しています。

By applying the mammalian codon usage to Cre recombinase, we improved Cre expression, as determined by immunoblot and functional analysis, in three different mammalian cell lines. The improved Cre (iCre) gene was also designed to reduce the high CpG content of the prokaryotic coding sequence, thereby reducing the chances of epigenetic silencing in mammals. Transgenic iCre expressing mice were obtained with good frequency, and in these mice loxP-mediated DNA recombination was observed in all cells expressing iCre. Moreover, iCre fused to two estrogen receptor hormone binding domains for temporal control of Cre activity could also be expressed in transgenic mice. However, Cre induction after administration of tamoxifen yielded only low Cre activity. Thus, whereas efficient activation of Cre fusion proteins in the brain needs further improvements, our studies indicate that iCre should facilitate genetic experiments in the mouse.