マウスセリンプロテアーゼTESP5は、おそらくグリコシルホスファチジルイノシトールに固定されたタンパク質として、おそらく精子膜の脂質ラフトに選択的に含まれています。

少なくともマウスでは、アクロシン以外の精子セリンプロテアーゼは、おそらく卵Zona pellucidaの限られたタンパク質分解に作用して運動性精子の浸透経路を作成することを以前に示しましたが、アクロシンの関与は完全には除外できません。マウスの精子に存在する42-kDaゼラチン - 水溶解セリンプロテアーゼは、Zona Pellucidaの精子浸透に関与する候補酵素です。この研究では、TESP5と呼ばれる精巣セリンプロテアーゼをコードするESTクローンをPCR増幅し、DNAフラグメントをプローブとして使用してマウスゲノムDNAライブラリーをスクリーニングしました。分離されたゲノムクローンのDNA配列は、Tesp5遺伝子が精巣精巣と好酸球ESP-1をコードする遺伝子と同一であることを示しました。アフィニティ精製抗テスポ抗体を使用した免疫化学分析により、5.0〜5.5の等電点を持つTESP5の42および41-kDA型が頭部に局在していることが明らかになりました。さらに、これらの2つの形態のTESP5は、精子膜のTriton X-100不溶性マイクロドメイン、脂質ラフトに選択的に含まれていました。これらの結果は、TESP5/Testisin/ESP-1と42-kDaの精子セリンプロテアーゼとの間の同一性を示しています。TESP5のタンパク質コーディング領域全体を運ぶ発現プラスミドによってHEK293細胞を形質転換すると、産生された組換えタンパク質は、バチルスセレウスホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼCで処理することにより細胞膜から放出され、TESP5が細胞細胞にグリコシルホスホリノシトルチオーシルチオーミであることを示しています。表面。組換えTESP5の酵素特性は、セリンプロテアーゼ阻害剤の基質特異性と阻害効果により、ラットアクロシンおよび膵臓トリプシンの特性と類似していたが、区別されていました。

We have previously indicated that at least in mouse, sperm serine protease(s) other than acrosin probably act on the limited proteolysis of egg zona pellucida to create a penetration pathway for motile sperm, although the participation of acrosin cannot be ruled out completely. A 42-kDa gelatin-hydrolyzing serine protease present in mouse sperm is a candidate enzyme involved in the sperm penetration of the zona pellucida. In this study, we have PCR-amplified an EST clone encoding a testicular serine protease, termed TESP5, and then screened a mouse genomic DNA library using the DNA fragment as a probe. The DNA sequence of the isolated genomic clones indicated that the TESP5 gene is identical to the genes coding for testicular testisin and eosinophilic esp-1. Immunochemical analysis using affinity-purified anti-TESP5 antibody revealed that 42- and 41-kDa forms of TESP5 with the isoelectric points of 5.0 to 5.5 are localized in the head, cytoplasmic droplet, and midpiece of cauda epididymal sperm probably as a membranous protein. Moreover, these two forms of TESP5 were selectively included into Triton X-100-insoluble microdomains, lipid rafts, of the sperm membranes. These results show the identity between TESP5/testisin/esp-1 and the 42-kDa sperm serine protease. When HEK293 cells were transformed by an expression plasmid carrying the entire protein-coding region of TESP5, the recombinant protein produced was released from the cell membrane by treatment with Bacillus cereus phosphatidylinositol-specific phospholipase C, indicating that TESP5 is glycosylphosphatidylinositol-anchored on the cell surface. Enzymatic properties of recombinant TESP5 was similar to but distinguished from those of rat acrosin and pancreatic trypsin by the substrate specificity and inhibitory effects of serine protease inhibitors.