FXR核内受容体のアッセイ方法としてのアルファスリーン、TR-FRET、およびTRFの比較

検出技術の新しい開発は、選択するさまざまな生体分子スクリーニング戦略を提供しています。その結果、核内受容体リガンドのスクリーニングのための分離ベースと非分離ベースの両方の形式の詳細な分析を実行しました。この研究では、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（TR-FRET）、アルファスクリーン、および時間分解蛍光（TRF）アッセイが最適化され、感度、再現性、および小型化能力に関して最適化されました。結果は、Alphascreenシステムが最高の感度とダイナミックレンジを持っていることを示しました。TRFアッセイは、必要な洗浄手順の数のためにより時間がかかりました。TR-FRETアッセイの変動は、おそらくレシオメトリック測定のためです。AlphascreenとTR-FRETアッセイの両方が、8マイクロールボリュームに小型化されました。Photomultipiperierチューブベースの読者のうち、Alphascreen Reader（Alphaquest）は、4つのPhotomultiplierチューブと同時読書を通じて、読み取り時間を速くするという利点を提示しました。

New developments in detection technologies are providing a variety of biomolecular screening strategies from which to choose. Consequently, we performed a detailed analysis of both separation-based and non-separation-based formats for screening nuclear receptor ligands. In this study, time-resolved fluorescence resonance energy transfer (TR-FRET), ALPHAScreen, and time-resolved fluorescence (TRF) assays were optimized and compared with respect to sensitivity, reproducibility, and miniaturization capability. The results showed that the ALPHAScreen system had the best sensitivity and dynamic range. The TRF assay was more time consuming because of the number of wash steps necessary. The TR-FRET assay had less interwell variation, most likely because of ratiometric measurement. Both the ALPHAScreen and the TR-FRET assays were miniaturized to 8-microl volumes. Of the photomultiplier tube-based readers, the ALPHAScreen reader (ALPHAQuest) presented the advantage of faster reading times through simultaneous reading with four photomultiplier tubes.