1-O-ヘキサデシル-2-デスオキシ-2-アミノ-sn-グリセロール、ヒトスフィンゴシンキナーゼの基質

ヒト スフィンゴシン キナーゼの基質特異性は、細菌で発現したポリ (His) タグ付きタンパク質を使用して調査されました。スフィンゴイド塩基の D-エリスロ異性体であるスフィンガニンとスフィンゲニンのみが効果的にリン酸化されました。長鎖 1-アルカノール、アルカン-1,2-ジオール、2-アミノ-1-アルカノールまたは 1-アミノ-2-アルカノール、および短鎖 2-アミノ-1,3-アルカンジオールは基質としては非常に貧弱であり、キナーゼが鎖長とアミノ基および二級ヒドロキシ基の位置を認識していることを示しています。ただし、1-O-ヘキサデシル-2-デスオキシ-2-アミノ-sn-グリセロールは、見かけの K(m) 値が 3.8 μM (スフィンゲニンの場合は 15.7 μM) である効率的な基質であるため、炭素 3 に遊離ヒドロキシ基があることは必須ではありません。この発見は、スフィンゴシンキナーゼ阻害剤を設計するための新しい展望を開きます。また、このエーテル脂質類似体は、血小板活性化因子の研究で頻繁に使用される前駆体、または分解されにくいリン脂質類似体から形成される可能性を排除できないため、ある程度の注意が必要です。

The substrate specificity of human sphingosine kinase was investigated using a bacterially expressed poly(His)-tagged protein. Only the D-erythro isomer of the sphingoid bases, sphinganine and sphingenine, was effectively phosphorylated. Long chain 1-alkanols, alkane-1,2-diols, 2-amino-1-alkanol or 1-amino-2-alkanol and short chain 2-amino-1,3-alkanediols were very poor substrates, indicating that the kinase is recognizing the chain length and the position of the amino and secondary hydroxy group. A free hydroxy group at carbon 3 is not a prerequisite, however, since 1-O-hexadecyl-2-desoxy-2-amino-sn-glycerol was an efficient substrate with an apparent K(m) value of 3.8 microM (versus 15.7 microM for sphingenine). This finding opens new perspectives to design sphingosine kinase inhibitors. It also calls for some caution since it cannot be excluded that this ether lipid analogue is formed from precursors that are frequently used in research on platelet activating factor or from phospholipid analogues which are less prone to degradation.