分化したHL-60細胞は、ヒト好中球の移動と走化性の分析のための有効なモデルシステムです

分化したHL-60細胞とヒト末梢血好中球の運動性特性の詳細な比較を実施しました。ビデオ顕微鏡検査と走化性のフィルターアッセイを使用して、好中球および分化したHL-60細胞の形態、化学動物、および走化性に対する走化性刺激とシグナル伝達タンパク質の阻害剤の効果を比較しました。また、ウエスタンブロッティングを使用して、シグナル伝達および細胞骨格タンパク質の発現を評価しました。走化性ペプチドは、好中球のそれに匹敵するHL-60細胞の前部尾の極性を誘導しました。走化性ペプチドに対する化学動態および走化性応答は、移動の平均速度、移動した細胞の割合、および活性化に最適な刺激の濃度に関して、両方の細胞タイプについても非常に類似していた。サイトカインインターロイキン-8は、好中球と比較して、分化したHL-60細胞の運動性応答を活性化する際に明らかに効果が低かった。HL-60細胞の運動性応答におけるRho活性化キナーゼとホスファチジルイノシトール3-キナーゼの重要な機能的役割は、分化中のアップレギュレーションと一致して、対応する酵素の特異性を持つ阻害剤を使用して確認できます。ここでHL-60細胞と好中球の間で観察された唯一の違いは、プロテインキナーゼC阻害剤の微分効果に関係しています。まとめでは、ここで示された結果は、走化性ペプチドで刺激された分化したHL-60細胞が研究する有効なモデルシステムであることを示しています。好中球移動の分子メカニズム。

We have carried out a detailed comparison of the motile properties of differentiated HL-60 cells and human peripheral blood neutrophils. We compared the effects of chemotactic stimuli and of inhibitors of signalling proteins on morphology, chemokinesis and chemotaxis of neutrophils and differentiated HL-60 cells using videomicroscopy and a filter assay for chemotaxis. We also assessed expression of signalling and cytoskeletal proteins using Western blotting. Chemotactic peptide induced a front-tail polarity in HL-60 cells comparable to that of neutrophils. Chemokinetic and chemotactic responses to chemotactic peptide were also very similar for both cell types, concerning mean speed of migration, the fraction of migrated cells and the concentration of stimulus optimal for activation. The cytokine interleukin-8 was in contrast clearly less effective in activating motile responses of differentiated HL-60 cells as compared to neutrophils. An important functional role of Rho-activated kinases and phosphatidylinositol 3-kinase in motile responses of HL-60 cells, consistent with their upregulation during differentiation, could be confirmed using inhibitors with specificity for the corresponding enzymes. The only difference observed here between HL-60 cells and neutrophils concerned the differential effects of a protein kinase C inhibitor.In summary, the results presented here show that differentiated HL-60 cells, stimulated with chemotactic peptide, are a valid model system to study molecular mechanisms of neutrophil emigration.