乳がんの有望な診断マーカーであるマンマグロビン/リポフィリンB複合体の精製と特性評価

乳がんの有望な診断マーカーであるマンマグロビンは、複合体の各成分のリポフィリンBと共有結合複合体を形成し、多くの乳房腫瘍と正常組織について測定され、メッセージ発現の相関はマンマグロビンとリポフィリンBの間で非常に有意でした（p <0.0001）。複合体は、標準的な生化学技術と免疫親和性クロマトグラフィーの両方によって精製されました。N末端シーケンスにより、マンマグロビンとリポフィリンBは、それぞれアミノ酸19および21後のシグナル配列の切断によって予測されるように処理されることが明らかになりました。完全にグリコシル化された型、炭水化物鎖の1つのない複合体、および部分的な酵素deglycosylation後のタンパク質chipアレイSeldi-tof質量分析によって検出されたdeglycosylatedタンパク質は、完全にグリコシル化された型を表している3つの分子量を表します。これは、マンマグロビンの一次シーケンスにおける2つの予測されたN結合グリコシル化部位と、各部位が約3500 Daの付着糖を持つと一致しています。還元剤は、マンマグロビンからリポフィリンBを放出し、自由ペプチドは、脱グリコシル化複合体の予測分子量で見られます。分子モデリング、二次構造予測、および円形二色性は、複合体が各極に3つのジスルフィドブリッジと炭水化物鎖を持つ小さなアルファヘリカル球であることを示しています。LC-ESI-MSは、マンマグロビンとリポフィリンBが頭から尾の向きに結合していることを示しています。この研究では、マンマグロビン/リポフィリンB複合体の生化学について説明し、乳がんの新規タンパク質ベースの血清学的マーカーとしてこの複合体を使用するための枠組みを築きます。

Mammaglobin, a promising diagnostic marker for breast cancer, forms a covalent complex with lipophilin B. mRNA levels for each component of the complex were determined for a number of breast tumors and normal tissues, and correlation of message expression was highly significant between mammaglobin and lipophilin B (p < 0.0001). The complex was purified by both standard biochemical techniques and immunoaffinity chromatography. N-Terminal sequencing revealed that mammaglobin and lipophilin B are processed as predicted by cleavage of their signal sequence after amino acids 19 and 21, respectively. Three molecular masses-representing the fully glycosylated form, the complex without one of the carbohydrate chains, and the deglycosylated proteins-are detected by ProteinChip array SELDI-TOF mass spectrometry after partial enzymatic deglycosylation. This is consistent with the two predicted N-linked glycosylation sites in the primary sequence of mammaglobin and each site having an attached sugar of approximately 3500 Da. Reducing agents release lipophilin B from mammaglobin, and the free peptides are seen at their predicted molecular masses in the deglycosylated complex. Molecular modeling, secondary structure prediction, and circular dichroism indicate that the complex is a small alpha-helical globule that has three disulfide bridges and a carbohydrate chain at each pole. LC-ESI-MS shows that mammaglobin and lipophilin B are bonded in a head to tail orientation. This work describes the biochemistry of the mammaglobin/lipophilin B complex and lays the framework for use of this complex as a novel protein-based serological marker for breast cancer.