草のヘビNatrix Natrix L（Lepidosauria、Serpentes）の副腎の早期発達

研究の目的は、個体発生の初期段階、つまり最初の標本の産卵から孵化までの草ヘビ (Natrix natrix L.) の副腎の発達と分化を調査することでした。研究に使用された材料は、草ヘビの胚のコレクションで構成されていました。ナトリックスの卵は、30℃の一定温度および100%の相対湿度の実験室で培養されました。胚は、産卵から孵化までの一定の時間の流れで単離されました。胚の年齢は、この種の通常の表に従って認定されました。組織学的および組織化学的研究のために、最小の胚を完全に固定しました。最も古い胚から、中腎および副腎原基を含む内側領域を切除した。組織化学的方法の要件に応じて、材料をさまざまな固定液、つまり 10% ホルマリン溶液、ブアン液、ウッド液、およびミロニグ液で固定し、パラフィンに包埋し、連続的な横切片、矢状切片および縦切片に分割しました。検討用の切片を H&E およびアザンで染色しました。クロム親和性組織中のアドレナリンとノルアドレナリンの検出には、Wood 法と Honoré 法が使用されました。 SGC 細胞は Bodian 後の銀染色法で検出されました。電子顕微鏡研究のために、副腎を、ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸緩衝液中の２．５％グルタルアルデヒドと２．０％パラホルムアルデヒド１：１で固定し、同じ緩衝液中の１．５％オスミン酸で後固定した。副腎の固定切片を Epon 812 に包埋しました。半薄切片および極薄切片をウルトラミクロトーム ウルトラトーム IV で切断しました。半薄切片はメチレンブルーで染色し、極薄切片は酢酸ウラニルとクエン酸鉛で定期的に対比し、JEM JEOL 1220 電子顕微鏡で検査および写真撮影しました。草ヘビの胚の発生過程における形態学的および計量的観察によれば、12 の発生段階を区別することができます。副腎皮質の原基は、卵孵化の第 1 学期に、中腎と大動脈背側の間に 2 つの非対称な鎖として現れます。それらは高密度の間葉細胞で構成されています。発生の第 2 学期では、原基に色素芽細胞と毛細血管が浸透します。間葉細胞は腎間細胞に分化しますが、色素芽細胞は腺の背側に配置されます。腺は、中腎から分離するカプセルによって囲まれています。卵の孵化の第 3 学期では、ノルアドレナリンだけがクロム親和性組織に現れます。ヘビが孵化する瞬間、副腎はその構造と機能の両方において完全に分化します。腎間組織の原基は、哺乳類と同様に間葉系細胞から分化します。ヘビの腎間組織の発生中に、分化の程度と超微細構造的特徴が異なるいくつかの種類の細胞が認識されます。 1. 間葉系細胞の特徴を持つ未分化細胞 2. 分化中の間葉系細胞 3. 間葉系細胞の特徴を持つ移行細胞4. 多形性ミトコンドリアと多数の脂肪滴を含む分化中の腎内細胞 5. 円形の脂肪滴と未発達の平滑小胞体を含む胎児腎内細胞 6. 管状および小胞クリスタ、大きな脂肪滴、多数のミエリン構造を有するミトコンドリアを含む移行期の腎間細胞7. 胎児腎間組織の変性細胞 8. 線維芽細胞の特徴を備えた分化した間葉細胞 上記の分類は非常に概略的かつ推定的です。卵孵化の第 1 学期における副腎の発達では、1 型および 2 型細胞が優勢です。 3 型および 4 型細胞は、副腎原基発達の第 2 学期に観察されました。卵の孵化の第 3 学期では、胎児の副腎は 5 型細胞で構成されていました。ヘビが孵化した瞬間、腎間組織には 5 型と 6 型の細胞が含まれていました。副腎の発達の次の日には、皮質と髄質との境界、例えば被膜の下で、多数の細胞が変性した。開発期間全体を通じて、副腎被膜は 7 型細胞から構築されました。副腎のクロム親和性組織は神経堤に由来します。これらの発見は、すべての発生学者の発見と一致します。最初のクロム親和性芽細胞は、発生段階 IV 頃に副腎皮質原基に浸潤しました。それらは腎間細胞と混合されており、孵化したばかりの時点で腺の背側に局在していました。色素芽細胞は、ニューロン様細胞から典型的な色素細胞に徐々に分化しました。すべてのクロム親和性芽細胞にはクロム親和性顆粒が含まれていました。クロム親和性顆粒のサイズと数密度は、発達とともに増加しました。孵化直前、クロム親和性組織の細胞にはノルアドレナリンのみが含まれていました。クロム親和性芽細胞からクロム親和性細胞への分化は、おそらく腎臓間組織の細胞によって産生されるホルモンの影響によって刺激され、制御される。グラスヘビの副腎の分化と発達の過程における形態学的、組織化学的および超微細構造観察によれば、6つの形態学的段階を区別することができます。

The aim of the study was to investigate the development and differentiation of the adrenal glands in the grass snake (Natrix natrix L.) during the early stages of ontogenesis, i.e., from egg-laying to hatching of the first specimens. The material used for the studies consisted of a collection of embryos of the grass snake. The Natrix eggs were incubated in the laboratory at a constant temperature of 30 degrees C and 100% relative humidity. Embryos were isolated in a regular sequence of time from egg-laying to hatching. The age of the embryos was qualified according to normal tables for this species. For histological and histochemical investigations, the smallest embryos were fixed in toto. From the oldest embryos, the medial region with the mesonephros and adrenal primordium were resected. Depending on the requirements of histochemical methods, the material was fixed in various fixatives, namely, 10% formalin solution, Bouin, Wood and Millonig fluid, embedded in paraffin and sectioned into serial transversal, sagittal and longitudinal sections. The sections for review were stained with H&E and azan. For detection of adrenaline and noradrenaline in chromaffin tissue, the Wood and Honoré methods were used. SGC cells were detected with the silver stain method after Bodian. For electron microscopic studies, the adrenal gland was fixed in 2.5% glutaraldehyde and 2.0% paraformaldehyde 1:1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.4 and post-fixed in 1.5% osmic acid in the same buffer. The fixed sections of the adrenal glands were embedded in Epon 812. Semithin and ultrathin sections were cut on ultramicrotome ultratome IV. Semithin sections were stained with methylene blue and ultrathin sections were routinely contrasted with uranyl acetate and lead citrate, then examined and photographed with the JEM JEOL 1220 electron microscope. According to morphological and metrical observation in the course of the grass snake embryo development, one can distinguish 12 stages of development. The primordia of the adrenal cortex appear at the first trimester of egg incubation as two asymmetrical strands between the mesonephros and aorta dorsalis. They are made of dense mesenchymal cells. At the second trimester of development, primordia are penetrated by chromaffinoblasts and capillaries. The mesenchymal cells differentiate into interrenal cells, while chromaffinoblasts are arranged dorsally of the gland. The glands are enclosed by the capsule which separates them from the mesonephros. At the third trimester of the eggs incubation, only noradrenaline appears in a chromaffin tissue. At the moment of snake hatching, the adrenal glands are completely differentiated, both in their structure and their function. The primordia of the interrenal tissue differentiate from mesenchymal cells similarly to mammals. During the development of the snake interrenal tissue, several types of cells can be recognized, varying in the degree of differentiation and in ultrastructural features: 1. Undifferentiated cells with features of mesenchymal cells 2. Differentiating mesenchymal cells 3. Transitional cells with features of mesenchymal and steroidogenic cells 4. Differentiating interrenal cells with pleomorphic mitochondria and numerous lipid droplets 5. Embryonic interrenal cells containing circular lipid droplets and underdeveloped smooth endoplasmic reticulum 6. Transitional interrenal cells containing mitochondria with tubular and vesicular cristae, large lipid droplets, numerous myelin structures, and well-developed smooth endoplasmic reticulum 7. Degenerating cells of embryonic interrenal tissue 8. Differentiating mesenchymal cells with features of fibroblasts The above classification is very schematic and presumptive. In developing adrenal glands at the first trimester of egg incubation type 1 and 2 cells predominate. Type 3 and 4 cells were observed at the second trimester of the adrenal primordia development. At the third trimester of egg incubation, embryonic adrenal glands were composed of the type 5 cells. At the moment of snake hatching, interrenal tissue contained type 5 and 6 cells. In the next days of the adrenal gland development, at the border between the cortex and in medulla as under the capsule, numerous cells were degenerated. During the entire development period the adrenal capsule was built from type 7 cells. The chromaffin tissue of the adrenal glands is derived from the neural crest. These findings agree with the findings of all embryologists. The first chromaffinoblasts infiltrated the adrenal cortex primordium around stage IV of development. They were mixed with interrenal cells and just at hatching they were localized dorsally of the gland. The chromaffinoblasts differentiated gradually from neuron-like cells to typical chromaffinocytes. All the chromaffinoblasts contained the chromaffin granules. The size and numerical density of the chromaffin granules increased with development. Just before hatching, the cells of the chromaffin tissue contained only noradrenaline. Differentiation chromaffinoblasts into chromaffin cells are probably stimulated and controlled by the influence of hormones, which are produced by the cells of the interrenal tissue. According to morphological, histochemical and ultrastructural observation in the course of adrenal differentiation and development in the grass snake, six morphological phases can be distinguished.