WILMSの腫瘍抑制遺伝子によるWNT-4調節、WT1

Wilmsの腫瘍抑制遺伝子WT1は、すべて4つのC末端亜鉛指モチーフを含む複数の核タンパク質アイソフォームをコードしています。WT1タンパク質は、in vitroで推定標的遺伝子を活性化および抑制することができますが、これらの推定標的遺伝子のin vivo関連性はしばしば未確認です。WT1変異は、Wilmsの腫瘍と乳児腎症、XYの擬似皮肉な症候群（DDS）をもたらす可能性があります。一般的なDDS点突然変異（R394W）を抱えたWT1を発現するマウスメソシフリック細胞株M15の安定したトランスフェクタントを確立しました。M15とトランスフェクタントC2Aの発現プロファイルの比較は、ナイロンベースのアレイを使用して実行されました。微分発現を示した遺伝子はほとんどありませんでした。しかし、分泌された糖タンパク質のWNT遺伝子ファミリーのメンバーであるWNT-4は、C2Aおよび他の同様のクローンでダウンレギュレートされました。HEK293安定したトランスフェクタントにおけるWT1-AまたはWT1-D発現のドキシサイクリン誘導も、WNT4発現の上昇を誘発しました。WNT4は、腎臓の発達中の間葉から上皮から上皮から上皮への移行にとって重要であり、魅力的な推定WT1標的となっています。WTの頻繁なLOHの領域である染色体1p35-36にヒトWNT-4遺伝子をマッピングし、ヒトWNT-4遺伝子のゲノム構造を特徴づけ、9 kBの即時プロモーターを分離しました。このプロモーター内にはいくつかの潜在的なWT1結合部位が存在しますが、レポーター分析はWT1によるWNT4の直接規制を強くサポートしていません。WT1によるWNT-4調節は、より遠いプロモーターまたはエンハンサー部位で発生するか、間接的であることを提案します。

The Wilms' tumour suppressor gene, WT1, encodes multiple nuclear protein isoforms, all containing four C-terminal zinc finger motifs. WT1 proteins can both activate and repress putative target genes in vitro, although the in vivo relevance of these putative target genes is often unverified. WT1 mutations can result in Wilms' tumour and the Denys-Drash Syndrome (DDS) of infantile nephropathy, XY pseudohermaphroditism and predisposition to Wilms' tumour. We have established stable transfectants of the mouse mesonephric cell line, M15, which express WT1 harbouring a common DDS point mutation (R394W). A comparison of the expression profiles of M15 and transfectant C2A was performed using Nylon-based arrays. Very few genes showed differential expression. However Wnt-4, a member of the Wnt gene family of secreted glycoproteins, was downregulated in C2A and other similar clones. Doxycycline induction of WT1-A or WT1-D expression in HEK293 stable transfectants also elicited an elevation in Wnt4 expression. Wnt4 is critical for the mesenchyme-to-epithelial transition during kidney development, making it an attractive putative WT1 target. We have mapped human Wnt-4 gene to chromosome 1p35-36, a region of frequent LOH in WT, have characterized the genomic structure of the human Wnt-4 gene and isolated 9 kb of immediate promoter. While several potential WT1 binding sites exist within this promoter, reporter analysis does not strongly support the direct regulation of Wnt4 by WT1. We propose that Wnt-4 regulation by WT1 occurs at a more distant promoter or enhancer site, or is indirect.