C7-MDCK細胞の単層におけるプリン作動性イオン電流：基底外側および頂端イオン輸送体の役割

この研究では、主要な細胞と挿入された細胞に似たC7およびC11-MDCK細胞の単層の単層における短絡電流（I（SC））のプリン作動性変調を調べます。C7単層では、ATPの基底外側および先端の適用により、I（SC）の同様の上昇が生じ、最大I（SC）増分が約10マイクロア/cm2の2〜3分で終了し、持続位相が終了し、最大I（SC）2マイクロア/cm2未満で10分で終了します。ATP誘導I（SC）は、粘膜溶液中のK+（Ba2+、Clotrimazole（CLT）、Clotrimazole（CLT）、Apamin）チャネルのNa+、Cl+および阻害剤の存在に鈍感でした。Cl-チャネル、DID、NPPBの阻害剤は、100 microMの濃度で頂端膜に添加され、ATP誘導I（SC）に影響しませんでしたが、500 microMではNPPBは70〜80％阻害しました。漿液性培地でのcl-の置換により、ATP誘導I（sc）が2〜3倍減少し、[k+] oの上昇は6〜60 mmの方向を変えました。基底外側NPPBは、約30 microMのED50でI（SC）を10倍阻害しましたが、CHTX（50 nM）とCLT（2 microM）はこのパラメーターを30〜50％減少させました。Na+、K+、ブメタニドによるクロコトランスポーツの抑制は、ATP誘導I（SC）の一時的な相に影響を与えず、その持続相をわずかに減少させました。ATPは、大底外膜全体にウメタニド耐性K+（86RB）の流入を7-8倍増加させ、CHTXおよびCLTで部分的に阻害されました。ATP処理C11細胞は無視できるI（SC）を示し、それらの存在はC7細胞のATPによってトリガーされるI（SC）に影響しませんでした。したがって、我々の結果は、ATP処理C7細胞の経細胞イオン電流が主に、一時的なcl分泌を提供する頂端および基底外側アニオン輸送体の結合機能によって引き起こされることを示しています。これらのトランスポーターは、アニオンチャネルブロッカーNPBBに対して異なる感度を持ち、CHTXおよびCLTによって阻害される基底外側K+チャネルの制御下にあります。

This study examines purinergic modulation of short-circuit current (I(SC)) in monolayers of C7- and C11-MDCK cells resembling principal and intercalated cells from collecting ducts. In C7 monolayers, basolateral and apical application of ATP led to similar elevation of I(SC), consisting of a transient phase with maximal I(SC) increment of approximately 10 microA/cm2 terminating in 2-3 min, and a sustained phase with maximal I(SC) less than 2 microA/cm2 and terminating in 10 min. ATP-induced I(SC) was insensitive to the presence of Na+, Cl- and inhibitors of K+ (Ba2+, charibdotoxin (ChTX), clotrimazole (CLT), apamin) and Na + (amiloride) channels in the mucosal solution. Inhibitors of Cl- channels, DIDS and NPPB, added to apical membranes at a concentration of 100 microM, did not affect ATP-induced I(SC), whereas at 500 microM, NPPB inhibited it by 70-80%. Substitution of Cl- with NO3- in serosal medium decreased ATP-induced I(SC) by 2-3-fold and elevation of [K+]o from 6 to 60 mM changed its direction. Basolateral NPPB inhibited I(SC) by 10-fold with ED50 of approximately 30 microM, whereas ChTX (50 nM) and CLT (2 microM) diminished this parameter by 30-50%. Suppression of Na+, K+, Cl- cotransport with bumetanide did not affect the transient phase of ATP-induced I(SC) and slightly diminished its sustained phase. ATP increased ouabainand bumetanide-resistant K+ (86Rb) influx across the basolateral membrane by 7-8-fold, which was partially inhibited with ChTX and CLT. ATP-treated C11 cells exhibited negligible I(SC), and their presence did not affect I(SC) triggered by ATP in C7 cells. Thus, our results show that transcellular ion current in ATP-treated C7 cells is mainly caused by the coupled function of apical and basolateral anion transporters providing transient Cl- secretion. These transporters possess different sensitivities to anion channel blocker NPBB and are under the control of basolateral K+ channels(s) inhibited by ChTX and CLT.