BUBR1は、他のスピンドルチェックポイントタンパク質のキネトコア局在に不可欠であり、そのリン酸化にはMAD1が必要です

スピンドルのチェックポイントは、すべての染色体が有糸分裂紡錘体に適切に付着するまで、後期開始を遅らせます。チェックポイント信号は、紡錘体微小管で結合していないか、張力をかけていない動原体で生成されます。不動のキネトコアは、BUBR1、BUB1、BUB3、MAD1、MAD2、およびCENP-Eを含むいくつかのチェックポイントタンパク質と関連しています。ここでは、BUBR1がアセノパスの卵抽出物のスピンドルチェックポイントにとって重要であることを示しています。タンパク質は蓄積し、不動の動原体で過剰リン酸化されます。BUBR1の免疫脱膜は、Bub1、Bub3、Mad1、Mad2、およびCenp-Eの動態測定結合を大幅に減少させます。BUBR1の喪失は、ANARAPHASEアクティベーターであるMAD2、BUB3、およびCDC20の間の相互作用も損なうことです。これらの欠陥は、野生型、キナーゼデッド、またはそのキナーゼドメインを欠く切り捨てられたBUBR1によって救助されており、BUBR1のキナーゼ活性が卵抽出物のスピンドルチェックポイントに不可欠ではないことを示しています。さらに、キネトコアのBubr1の局在と過リン酸化は、Bub1とMad1に依存していますが、MAD2は依存していません。この論文は、BUBR1が他のスピンドルチェックポイントタンパク質のキネトコア関連で重要な役割を果たし、MAD1が動原体でBUBR1過剰リン酸化を促進することを示しています。

The spindle checkpoint delays anaphase onset until all chromosomes have attached properly to the mitotic spindle. Checkpoint signal is generated at kinetochores that are not bound with spindle microtubules or not under tension. Unattached kinetochores associate with several checkpoint proteins, including BubR1, Bub1, Bub3, Mad1, Mad2, and CENP-E. I herein show that BubR1 is important for the spindle checkpoint in Xenopus egg extracts. The protein accumulates and becomes hyperphosphorylated at unattached kinetochores. Immunodepletion of BubR1 greatly reduces kinetochore binding of Bub1, Bub3, Mad1, Mad2, and CENP-E. Loss of BubR1 also impairs the interaction between Mad2, Bub3, and Cdc20, an anaphase activator. These defects are rescued by wild-type, kinase-dead, or a truncated BubR1 that lacks its kinase domain, indicating that the kinase activity of BubR1 is not essential for the spindle checkpoint in egg extracts. Furthermore, localization and hyperphosphorylation of BubR1 at kinetochores are dependent on Bub1 and Mad1, but not Mad2. This paper demonstrates that BubR1 plays an important role in kinetochore association of other spindle checkpoint proteins and that Mad1 facilitates BubR1 hyperphosphorylation at kinetochores.