トリコモナス膣からのプリンヌクレオシドホスホリラーゼは、細菌酵素のホモログです

膣トリコモナスは寄生性原生動物であり、トリコモニア症の原因物質です。プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（PNP）とプリンヌクレオシドキナーゼで構成される主要なプリンサルベージシステムは、この生物におけるプリンヌクレオチドのDE NOVO合成の欠如により、抗リコンモニア薬として選択的阻害剤を設計するための潜在的な標的を提示します。T. vaginalis PNPをコードするcDNAは、PNPが不足している大腸菌株の補完によって分離され、発現し、組換え酵素は見かけの均一性に精製されました。ヒトPNPのシーケンス同一性は28％しかありませんが、大腸菌酵素と57％の同一性があります。ゲルろ過は、細菌PNPと同様に、六量体形態の酵素を示しました。T. vaginalis PNP触媒反応の定常状態の動態分析により、ヌクレオシダーゼ反応におけるイノシン、グアノシン、およびアデノシンの31.5、59.7、および6.1ミクロムのK（M）が得られ、45.6、35.9、および12.3ミクロムのk（ヌクレオシド合成の方向におけるグアニン、およびアデニン。この基質特異性は、細菌PNPの特異性と類似しているようです。基質としてのアデニンを伴うこの酵素の触媒効率は、アデニンまたはアデノシンのいずれかで無視できる活性を持っている哺乳類PNPとの明確な格差を表して、ヒポキサンチンまたはグアニンのいずれかでそれよりも58倍高くなっています。生成物阻害と平衡同位体交換によって決定されるT. vaginalis PNP触媒反応の速度論的メカニズムは、最初にプリンヌクレオシドの順序付けられた基質（プリン塩基およびリボース1-リン酸）のランダムな結合により、無機リン酸が続いた。哺乳類PNPに影響を与えない大腸菌PNPの阻害剤として知られるアデノシンの類似体であるホルミシンAは、アデノシンと競合することにより、2.3マイクロームのK（IS）でT. vaginalis PNPを阻害することが示されました。T.膣PNPは、したがって、細菌PNPのファミリーに属し、抗調子化学療法の標的を構成します。

Trichomonas vaginalis is a parasitic protozoan and the causative agent of trichomoniasis. Its primary purine salvage system, consisting of a purine nucleoside phosphorylase (PNP) and a purine nucleoside kinase, presents potential targets for designing selective inhibitors as antitrichomonial drugs because of lack of de novo synthesis of purine nucleotides in this organism. cDNA encoding T. vaginalis PNP was isolated by complementation of an Escherichia coli strain deficient in PNP and expressed, and the recombinant enzyme was purified to apparent homogeneity. It bears only 28% sequence identity with that of human PNP but 57% identity with the E. coli enzyme. Gel filtration showed the enzyme in a hexameric form, similar to the bacterial PNPs. Steady-state kinetic analysis of T. vaginalis PNP-catalyzed reactions gave K(m)'s of 31.5, 59.7, and 6.1 microM for inosine, guanosine, and adenosine in the nucleosidase reaction and 45.6, 35.9, and 12.3 microM for hypoxanthine, guanine, and adenine in the direction of nucleoside synthesis. This substrate specificity appears to be similar to that of bacterial PNPs. The catalytic efficiency of this enzyme with adenine as substrate is 58-fold higher than that with either hypoxanthine or guanine, representing a distinct disparity with the mammalian PNPs, which have negligible activity with either adenine or adenosine. The kinetic mechanism of T. vaginalis PNP-catalyzed reactions, determined by product inhibition and equilibrium isotope exchange, was by random binding of substrates (purine base and ribose 1-phosphate) with ordered release of the purine nucleoside first, followed by inorganic phosphate. Formycin A, an analogue of adenosine known as an inhibitor of E. coli PNP without any effect on mammalian PNPs, was shown to inhibit T. vaginalis PNP with a K(is) of 2.3 microM by competing with adenosine. T. vaginalis PNP thus belongs to the family of bacterial PNPs and constitutes a target for antitrichomonial chemotherapy.