mRNAディスプレイを使用した高親和性抗体模倣物の方向付けされた進化

免疫グロブリン様タンパク質の3つの露出ループである第10フィブロネクチン型IIIドメイン（10FN3）をランダム化することにより、10を超える（12）> 10（12）>共有結合したmRNAタンパク質分子のライブラリーを構築しました。TNF-alphaを結合した抗体模倣物は、mRNAディスプレイを使用してライブラリから分離されました。10ラウンドの選択により、1〜24 nmの間の解離定数（k（d））とTNF-alphaを結合する10FN3バリアントが生成されました。アフィニティ成熟後、測定された最低k（d）は午後20時でした。選択された抗体模倣物は、タンパク質マイクロアレイに固定されたときにTNF-αを捕捉することが示されました。10FN3ベースの足場ライブラリとmRNA-ディスプレイにより、高親和性の特定の抗原結合タンパク質の分離が可能になります。このような結合タンパク質の潜在的な応用には、診断タンパク質マイクロアレイとタンパク質治療が含まれます。

We constructed a library of >10(12) unique, covalently coupled mRNA-protein molecules by randomizing three exposed loops of an immunoglobulin-like protein, the tenth fibronectin type III domain (10Fn3). The antibody mimics that bound TNF-alpha were isolated from the library using mRNA display. Ten rounds of selection produced 10Fn3 variants that bound TNF-alpha with dissociation constants (K(d)) between 1 and 24 nM. After affinity maturation, the lowest K(d) measured was 20 pM. Selected antibody mimics were shown to capture TNF-alpha when immobilized in a protein microarray. 10Fn3-based scaffold libraries and mRNA-display allow the isolation of high-affinity, specific antigen binding proteins; potential applications of such binding proteins include diagnostic protein microarrays and protein therapeutics.