アデノウイルスは、クラスリンを介した取り込みとともにマクロピノサイトーシスとエンドソーム漏れを引き起こします

アデノウイルス2型（AD2）は、コックスサッキーBウイルスAD受容体に結合し、アルファーブインテグリンcore受容器の活性化によりエンドサイトーシングされます。ここでは、ドミナントネガティブクラスリンハブ、EPS15、またはK44A-ジナミン（DYN）の発現が上皮細胞へのAD2取り込みを阻害し、クラスリン依存性ウイルスエンドサイトーシスを示すことを示しています。驚くべきことに、ADは、ウイルスの内在化と一致するが、受容体を介したトランスフェンの取り込みに影響を与えずに、液相トレーサーのエンドサイトーシス取り込みを強く刺激しました。大量の刺激されたエンドサイトーシス活性は、マクロピノサイトーシスでした。マクロピノサイトーシスは、Alphavインテグリン、PKC、F-アクチン、およびアミロライド感受性Na+/H+交換器に依存していました。マクロピノサイトーシス刺激は、K44a-dyn発現細胞で発生したため、ウイルスの脱出の結果ではありませんでした。驚くべきことに、エンドソーム含有量の30〜50％がコントロールのサイトゾルとK44A-dyn発現細胞に放出され、液体相陽性エンドソームの数は非感染細胞のレベルを下回り、マクロピノソーム溶解を示しています。マクロピノソーム含有量の放出はAD用量に依存していましたが、マクロピノソーム膜上のAD粒子の存在は、含有量の放出には十分ではありませんでした。細胞表面からのADシグナル伝達は、マクロピノソームの形成と漏れの誘導を制御し、これはサイトゾルと感染へのウイルスの出口と相関すると結論付けています。

Adenovirus type 2 (Ad2) binds the coxsackie B virus Ad receptor and is endocytosed upon activation of the alphav integrin coreceptors. Here, we demonstrate that expression of dominant negative clathrin hub, eps15, or K44A-dynamin (dyn) inhibited Ad2 uptake into epithelial cells, indicating clathrin-dependent viral endocytosis. Surprisingly, Ad strongly stimulated the endocytic uptake of fluid phase tracers, coincident with virus internalization but without affecting receptor-mediated transferrin uptake. A large amount of the stimulated endocytic activity was macropinocytosis. Macropinocytosis depended on alphav integrins, PKC, F-actin, and the amiloride-sensitive Na+/H+ exchanger, which are all required for Ad escape from endosomes and infection. Macropinocytosis stimulation was not a consequence of viral escape, since it occurred in K44A-dyn-expressing cells. Surprisingly, 30-50% of the endosomal contents were released into the cytosol of control and also K44A-dyn-expressing cells, and the number of fluid phase-positive endosomes dropped below the levels of noninfected cells, indicating macropinosomal lysis. The release of macropinosomal contents was Ad dose dependent, but the presence of Ad particles on macropinosomal membranes was not sufficient for contents release. We conclude that Ad signaling from the cell surface controls the induction of macropinosome formation and leakage, and this correlates with viral exit to the cytosol and infection.