ヒト血小板におけるTRPCタンパク質の発現と役割：TRPC6がストアに依存しないカルシウム侵入チャネルを形成する証拠

ストアオペレーションCa（++）エントリ（SOCE）は、血小板のCa（++）エントリの主要な経路を構成すると考えられています。最近、3つのグループ（TRPC、TRPM、およびTRPV）に分割された多くの過渡受容体ポテンシャル（TRP）タンパク質がSOCEチャネルとして示唆されています。ヒト血小板におけるTRPCタンパク質の発現と機能を報告します。TRPC6は高レベルで、TRPC1が低レベルで見つかります。精製血漿（PM）および細胞内膜（IM）を使用して、TRPC6はPMにありますが、TRPC1はIMに局在しています。Fura-2搭載血小板を使用して、TRPC6発現に沿って、1-オレイル-2-アセチル-Sn-グリセロール（OAG）がタンパク質とは独立してCa（++）とBa（2+）の侵入を刺激したと報告しています。キナーゼC.トロンビンはまた、Ca（++）とBa（2+）の侵入を誘導しましたが、店を枯渇させるThapsigarginは、Ca（++）のみの侵入を誘導しました。したがって、トロンビンは、SOCEに依存しないメカニズムを介してTRPC6を活性化しました。リン酸化研究では、TRPC6もTRPC1もチロシンキナーゼの基質ではなかったと報告しています。TRPC6は、cAMP依存性プロテインキナーゼ（cAMP-PK）によってリン酸化され、他のcAMP-PK基質に関連していました。TRPC1はCAMP-PKによってリン酸化されたものではなく、他の基質とも関連していました。CAMP-PKの活性化はCA（++）を阻害しましたが、トロンビンによって誘導されたBA（2+）侵入はなく、CA（++）もBA（2+）侵入がOAGによって刺激されませんでした。これらの結果は、TRPC6がトロンビンとOAGによって刺激されたSOCEに依存しない非選択的陽イオン侵入チャネルであることを示唆しています。TRPC6はCAMP-PKの基質ですが、リン酸化は陽イオン透過に影響を与えないようです。TRPC1はIMにあり、店舗のレベルでの役割を示唆しています。

Store-operated Ca(++) entry (SOCE) is thought to comprise the major pathway for Ca(++) entry in platelets. Recently, a number of transient receptor potential (TRP) proteins, which have been divided into 3 groups (TRPC, TRPM, and TRPV), have been suggested as SOCE channels. We report the expression and function of TRPC proteins in human platelets. TRPC6 is found at high levels and TRPC1 at low levels. Using purified plasma (PM) and intracellular membranes (IM), TRPC6 is found in the PM, but TRPC1 is localized to the IM. Using Fura-2-loaded platelets, we report that, in line with TRPC6 expression, 1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol (OAG) stimulated the entry of Ca(++) and Ba(2+) independently of protein kinase C. Thrombin also induced the entry of Ca(++) and Ba(2+), but thapsigargin, which depletes the stores, induced the entry of only Ca(++). Thus, thrombin activated TRPC6 via a SOCE-independent mechanism. In phosphorylation studies, we report that neither TRPC6 nor TRPC1 was a substrate for tyrosine kinases. TRPC6 was phosphorylated by cAMP-dependent protein kinase (cAMP-PK) and associated with other cAMP-PK substrates. TRPC1 was not phosphorylated by cAMP-PK but also associated with other substrates. Activation of cAMP-PK inhibited Ca(++) but not Ba(2+) entry induced by thrombin and neither Ca(++) nor Ba(2+) entry stimulated by OAG. These results suggest that TRPC6 is a SOCE-independent, nonselective cation entry channel stimulated by thrombin and OAG. TRPC6 is a substrate for cAMP-PK, although phosphorylation appears to not affect cation permeation. TRPC1 is located in IM, suggesting a role at the level of the stores.