in vitroでの血液脳関門を横切るamentoflavoneの輸送

ビフラボンamentoflavoneは、軽度から中程度のうつ病の治療に広く使用されている植物であるHypericum perforatum L.（clusiaceae）の成分です。Amentoflavoneは、GABA A-受容体（IC（50）= 14.9 nm）のベンゾジアゼピン結合部位へのフルマゼニルの結合を阻害します。この受容体に到達する前に血液脳関門（BBB）を通過する必要があるため、BBBを介した[（3）H] - メモフラボンの浸透は、ブタ脳毛細血管内皮細胞の原発性細胞培養で構成されるin vitroモデルで研究されました（BCEC）。濃度依存性の取り込み（37-2000 nm）は、飽和性でも温度に敏感でも、主要な取り込みメカニズムとしての受動拡散を示しています。この発見は、BCEC単層を介した輸送実験によって確認されました（適用された用量の2％以上が30分後に輸送されました）。ハイペリカム抽出物の共投与は、アメントフラボン輸送の増加を大幅に増加させます（Amentoflavone単独：透過性係数P（APP）= 4.59.10（-6）cm/s;共系投与スクロース：P（APP）= 3.22.10（-6）cm/s; amentoflavoneと一緒に：P（APP）= 6.74.10（-6）cm/s傍細胞透過性を調節することにより、おそらく輸送。P糖タンパク質（P-gp）過剰発現細胞株P388-MDRを使用した実験では、Amentoflavoneの取り込みがP-gp阻害剤ベラパミルの添加により有意に増強され、細胞からP-gp媒介バックトランスポートが示唆されました。結論として、私たちの発見は、Amentoflavoneが受動的拡散によりin vitroで血液脳関門を通過できることを示しています。

The biflavone amentoflavone is an ingredient of Hypericum perforatum L. (Clusiaceae), a plant which is widely used for the treatment of mild to moderate depression. Amentoflavone inhibits the binding of flumazenil to the benzodiazepine binding site of the GABA A -receptor (IC(50) = 14.9 nM). Since it has to pass the blood-brain barrier (BBB) before reaching this receptor, the penetration of [(3)H]-amentoflavone through BBB was studied in an in vitro model consisting of primary cell cultures of porcine brain capillary endothelial cells (BCEC). Concentration-dependent uptake (37-2000 nM) was neither saturable nor temperature-sensitive indicating passive diffusion as the major uptake mechanism. This finding was confirmed by transport experiments through BCEC monolayers (> 2 % of applied dose was transported after 30 min). Co-administration of Hypericum extract increased amentoflavone transport significantly (amentoflavone alone: permeability coefficient P(app) = 4.59.10(-6) cm/s; co-administrated sucrose: P(app) = 3.22.10(-6)cm/s; amentoflavone together with hypericum: P(app) = 6.74.10(-6)cm/s, co-administrated sucrose P(app) = 5.49.10(-6)cm/s) indicating that Hypericum constituents enhance amentoflavone transport possibly by modulating paracellular permeability. Experiments with the P-glycoprotein (P-gp) overexpressing cell line P388-MDR showed that amentoflavone uptake was significantly enhanced by addition of the P-gp inhibitor verapamil, suggesting a P-gp mediated back-transport out of the cells. In conclusion, our findings show, that amentoflavone is able to pass the blood-brain barrier in vitro by passive diffusion.