Micrococcus luteusのRPF遺伝子は、本質的な分泌成長因子をコードします

Micrococcus luteusは、RPFと呼ばれる小さなタンパク質を分泌します。これは、オートクリンとパラクリンのシグナル伝達機能を備えており、休眠細胞の蘇生に必要です。もともと積極的に成長している培養の上清から分離されていたRPFは、活発に成長している細菌の表面でも検出されました。ほとんどの分子は、タンパク質の切り捨てられた形であり、「RPFドメイン」のみを含むタンパク質の切り捨てられた形で完全に活性であるため、細胞表面で非生産的に隔離される可能性があります。おそらく細胞エンベロープへの結合を媒介するC末端Lysmモジュールは、生物活性には必要ありません。RPFは、M。luteusの成長に不可欠でした。低密度で最小限の培地に接種した洗浄細胞は、その不在下で成長することができませんでした。さらに、接種時に抗RPF抗体が培地に組み込まれることは、細菌の成長も妨げました。破壊された形の遺伝子を使用してRPFを不活性化することはできませんでした。この遺伝子では、ほとんどのコーディングシーケンスが選択可能なチオストレップトン抵抗マーカーに置き換えられました。遺伝子の破壊は、RPFの2番目の機能的なプラスミドに配置されたコピーの存在下で可能でしたが、タンパク質産物が分泌シグナル配列を欠いているRPF誘導体の存在ではありませんでした。私たちが知る限り、RPFは、細菌の成長に不可欠な真に分泌されたタンパク質の最初の例です。結核菌および他のマイコバクテリアによって巧妙に促進されたRPF様タンパク質が同様に不可欠であることが証明された場合、適切な機能への干渉は、結核や他のマイコバクテリア疾患から保護し、治療するための新しい機会を提供する可能性があります。

Micrococcus luteus secretes a small protein called Rpf, which has autocrine and paracrine signalling functions and is required for the resuscitation of dormant cells. Originally isolated from the supernatant of actively growing cultures, Rpf was also detected on the surface of actively growing bacteria. Most molecules may be sequestered non-productively at the cell surface, as a truncated form of the protein, encompassing only the 'Rpf domain' is fully active. The C-terminal LysM module, which probably mediates binding to the cell envelope, is not required for biological activity. Rpf was essential for growth of M. luteus. Washed cells, inoculated at low density into a minimal medium, could not grow in its absence. Moreover, the incorporation of anti-Rpf antibodies into the culture medium at the time of inoculation also prevented bacterial growth. We were unable to inactivate rpf using a disrupted form of the gene, in which most of the coding sequence was replaced with a selectable thiostrepton resistance marker. Gene disruption was possible in the presence of a second, functional, plasmid-located copy of rpf, but not in the presence of a rpf derivative whose protein product lacked the secretory signal sequence. As far as we are aware, Rpf is the first example of a truly secreted protein that is essential for bacterial growth. If the Rpf-like proteins elaborated by Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria prove similarly essential, interference with their proper functioning may offer novel opportunities for protecting against, and treating, tuberculosis and other mycobacterial disease.