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すると翻訳の精度が向上します
X連鎖網膜症は、網膜内層内で分裂することで、初期の寿命に視覚喪失をもたらします。原因遺伝子rs1（レチノシシンをコードする）の多くのミスセンスおよびタンパク質が切り捨てられた変異が特定されていますが、疾患の重症度は変異依存性ではありません。レチノシシンは、球状の立体構造があると予測される可溶性分泌タンパク質です。ミスセンス変異は、タンパク質の折り畳みを妨害し、異常な立体構造と細胞内保持と除去につながると予想されます。この仮説をテストするために、COS-7細胞で7つの病理学的RS1変異（L12H、C59S、G70S、R102W、G109R、R141G、R213W）を発現し、細胞内処理と輸送を調査しました。免疫ブロッティングと共焦点蛍光免疫細胞化学を使用して、WT RS1の正常な分泌を示しますが、変異RS1および分子内貯留の分泌を減少させた（C59SおよびR141G）または存在しない（L12H、G70S、R102W、G109RおよびR213W）。さらに、L12H RS1がプロテアソームによって分解され、in vitro転写/翻訳がそのシグナルペプチドの切断と小胞体への転座の両方の欠陥を明らかにしたことを示しています。我々の結果は、RS1の病理学的基礎が変異タンパク質の大部分の細胞内保持であることを示しており、これは疾患の重症度が変異特異的ではない理由を説明するかもしれません。さらに、RS1のin vitro発現は、RS1遺伝子内の配列変化の病原性を調査するための有用な機能アッセイである可能性があることを示しました。
X連鎖網膜症は、網膜内層内で分裂することで、初期の寿命に視覚喪失をもたらします。原因遺伝子rs1（レチノシシンをコードする）の多くのミスセンスおよびタンパク質が切り捨てられた変異が特定されていますが、疾患の重症度は変異依存性ではありません。レチノシシンは、球状の立体構造があると予測される可溶性分泌タンパク質です。ミスセンス変異は、タンパク質の折り畳みを妨害し、異常な立体構造と細胞内保持と除去につながると予想されます。この仮説をテストするために、COS-7細胞で7つの病理学的RS1変異（L12H、C59S、G70S、R102W、G109R、R141G、R213W）を発現し、細胞内処理と輸送を調査しました。免疫ブロッティングと共焦点蛍光免疫細胞化学を使用して、WT RS1の正常な分泌を示しますが、変異RS1および分子内貯留の分泌を減少させた（C59SおよびR141G）または存在しない（L12H、G70S、R102W、G109RおよびR213W）。さらに、L12H RS1がプロテアソームによって分解され、in vitro転写/翻訳がそのシグナルペプチドの切断と小胞体への転座の両方の欠陥を明らかにしたことを示しています。我々の結果は、RS1の病理学的基礎が変異タンパク質の大部分の細胞内保持であることを示しており、これは疾患の重症度が変異特異的ではない理由を説明するかもしれません。さらに、RS1のin vitro発現は、RS1遺伝子内の配列変化の病原性を調査するための有用な機能アッセイである可能性があることを示しました。
X-linked retinoschisis results in visual loss in early life with splitting within the inner retinal layers. Many missense and protein truncating mutations of the causative gene RS1 (encoding retinoschisin) have been identified but disease severity is not mutation-dependent. Retinoschisin is a soluble secretory protein predicted to have a globular conformation. Missense mutations would be expected to interfere with protein folding leading to an abnormal conformation and intracellular retention and elimination. To test this hypothesis we have expressed seven pathological RS1 mutations (L12H, C59S, G70S, R102W, G109R, R141G and R213W) in COS-7 cells and investigated their intracellular processing and transport. Using immunoblotting and confocal fluorescent immunocytochemistry we show normal secretion of WT RS1, but either reduced (C59S and R141G) or absent (L12H, G70S, R102W, G109R and R213W) secretion of mutant RS1 and intracellular retention. In addition, we show that L12H RS1 is degraded by proteasomes and in vitro transcription/translation revealed the defects in both cleavage of its signal peptide and translocation into the endoplasmic reticulum. Our results indicate the pathological basis of RS1 is intracellular retention of the majority of mutant proteins, which may explain why disease severity is not mutation-specific. Furthermore, we have shown that in vitro expression of RS1 may be a useful functional assay to investigate the pathogenicity of sequence changes within the RS1 gene.
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