Biacore 2000で測定されたタンパク質 - ヘパリン相互作用は、ヘパリン固定化の方法の影響を受けます

Biacore 2000などの表面プラズモン共鳴（SPR）バイオセンサーは、タンパク質 - ヘパリン相互作用の分析に役立つツールです。一般的に、ビオチン化ヘパリンは、ストレプトアビジンでコーティングされた表面で捕獲され、その後の結合分析のためにヘパリン化された表面を作成します。この研究では、ヘパリンのビオチン化のために一般的に使用される3つの技術、すなわち、ヘパリン鎖に沿ったカルボキシレート群または魅惑的でないアミンのいずれか、またはヘパリン鎖の還元末端を介して結合しました。ビオチン化ヘパリン誘導体をストレプトアビジンセンサーチップに固定化し、いくつかのヘパリン結合タンパク質を調べました。調査した表面のうち、還元末端を介して付着したヘパリンは結合能力が最も高く、場合によっては、テストされたタンパク質に対してより高い親和性がありました。イントラチャインベアアミンを介して固定化されたヘパリンは、中間結合能力と親和性を有し、ヘパリンはウロン酸のカルボキシレート基を介して固定化されていた。これらの結果は、ヘパリン分子の内部修飾を介してヘパリンを表面に固定化することが、特定のヘパリン結合タンパク質の結合に影響を与える可能性があることを示唆しています。

Surface plasmon resonance (SPR) biosensors such as the BIAcore 2000 are a useful tool for the analysis of protein-heparin interactions. Generally, biotinylated heparin is captured on a streptavidin-coated surface to create heparinized surfaces for subsequent binding analyses. In this study we investigated three commonly used techniques for the biotinylation of heparin, namely coupling through either carboxylate groups or unsubstituted amines along the heparin chain, or through the reducing terminus of the heparin chain. Biotinylated heparin derivatives were immobilized on streptavidin sensor chips and several heparin-binding proteins were examined. Of the surfaces investigated, heparin attached through the reducing terminus had the highest binding capacity, and in some cases had a higher affinity for the proteins tested. Heparin immobilized via intrachain bare amines had intermediate binding capacity and affinity, and heparin immobilized through the carboxylate groups of uronic acids had the lowest capacity for the proteins tested. These results suggest that immobilizing heparin to a surface via intrachain modifications of the heparin molecule can affect the binding of particular heparin-binding proteins.