アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを使用したDNA依存性プロテインキナーゼの選択的不活性化：放射線誘発DNA二本鎖切断の再結合とヒト癌細胞株の放射線感受性の結果

アンチセンス - オリゴデオキシヌクレオチド（AS-ODN）を伴うDNA依存性プロテインキナーゼ活性の阻害と、DNA-ドゥーブル鎖切断（DSB）および放射線感度の再結合に対するその結果は、ヒト非小細胞肺癌（NSCLC）で研究されました。細胞株。細胞に、DNA依存性プロテインキナーゼ（DNA-PKCS）の触媒サブユニットに特異的なAS ODNをトランスフェクトしました。それに比べて、細胞は、DNA-PK活性の強力だが非特異的な阻害剤であるワートマニンで処理されました。AS-ODNは、約100〜200 IC50のWortmanninのIC50でキナーゼ活性を効率的に減少させ、300 nm AS ODNで細胞の処理を増加させ、Aによる照射後4時間後に残留DSBの割合を増加させました。A549、H460、およびH661細胞でそれぞれ4.4、2.6、および1.7の因子。20 Micro M Wortmanninによる治療後のそれぞれの値は、5.3、4.3、および2.2でした。AS-ODNおよびWortmanninによるDNA-PK活性の阻害は、NSCLC細胞株の生存率も減少させました。これらのデータは、DNA-PKCのキナーゼ活性がワートマンニンと同じように有効なAS-ODNで特異的に阻害される可能性があり、NSCLC細胞株のDNA-DSB再生および放射線増感の著しい阻害をもたらすことを示しています。

The inhibition of DNA-dependent protein kinase activity with antisense-oligodeoxynucleotide (As-ODN) and its consequences for the rejoining of DNA-double-strand breaks (Dsbs) and radiation sensitivity was studied in human non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines. Cells were transfected with As-ODNs specific for the catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase (DNA-PKcs). In comparison, cells were treated with Wortmannin, a potent but nonspecific inhibitor of DNA-PK activity. As-ODN efficiently reduced the kinase activity with an IC50 of about 100-200 IC50 of Wortmannin was at approximately 5-10 micro M. Treatment of cells with 300 nM As-ODN increased the fraction of residual Dsb at 4 h after irradiation by a factor of 4.4, 2.6, and 1.7 in A549, H460, and H661 cells, respectively. The respective values after treatment with 20 micro M Wortmannin were 5.3, 4.3, and 2.2. Inhibition of DNA-PK activity by As-ODN and Wortmannin also decreased the surviving fraction of the NSCLC cell lines. These data show that kinase activity of DNA-PKcs can be specifically inhibited with As-ODN as effective as Wortmannin and results in marked inhibition of DNA-Dsb rejoining and radiosensitization of NSCLC cell lines.