新規、単純で正確なクローン性アッセイ、およびエリスロポエチンに対するBFU-E応答との新規、単純、正確性アッセイ、および比較による多菌性および血小板の識別

必須血栓性腫系（ET）および多生学症（PV）は、血球数の上昇の他の原因と区別することがしばしば困難なクローン骨髄増殖性障害です。したがって、クローン造血を確実に検出できるアッセイは、診断にとって非常に価値があります。以前に、G6PD、IDS、およびMPP1遺伝子を含む3つのX-染色体転写ベースのクローン性アッセイ（TCA）を報告しました。クローン性を検出する能力を高めるために、2つの追加のX染色体遺伝子の転写産物を検出するための単純なTCAを開発しました：ブルートンチロシンキナーゼ（BTK）と4とハーフLIMドメイン1（FHL1）。TCAの組み合わせは、女性被験者の約90％にクローン造血の有無を確立しました。両方の遺伝子がX染色体の不活性化の影響を受け、すべての主要な米国の民族グループで多型であることを示しています。5つのTCAを使用して、46人の女性患者のクローン性を検査し、エリスロポエチン非依存性赤血球コロニー（EEC）および顆粒球PRV-1 mRNAレベルのアッセイを使用して、多腸細胞と血小板を識別しました。これらのうち、家族性多菌炎症または血小板症の19人の患者全員がポリクローナル造血を有していましたが、骨髄増殖性障害の臨床的証拠と臨床的に不明瞭な多染色血症の1人の患者の26人のうち22人がクローンでした。興味深いことに、PV患者2人の患者を対象としたインターフェロンアルファ療法は、ポリクローナル造血へのクローンの復帰と関連していました。EECは、PVの14人のうち14人、ETの12人中4人の患者で観察され、PVの13人の患者のうち9人、ET。したがって、これらの新規クローン性アッセイは、多菌類の状態と血小板レベルの増加を伴う障害の診断と追跡に役立ちます。

Essential thrombocythemia (ET) and polycythemia vera (PV) are clonal myeloproliferative disorders that are often difficult to distinguish from other causes of elevated blood cell counts. Assays that could reliably detect clonal hematopoiesis would therefore be extremely valuable for diagnosis. We previously reported 3 X-chromosome transcription-based clonality assays (TCAs) involving the G6PD, IDS, and MPP1 genes, which together were informative in about 65% of female subjects. To increase our ability to detect clonality, we developed simple TCA for detecting the transcripts of 2 additional X-chromosome genes: Bruton tyrosine kinase (BTK) and 4-and-a-half LIM domain 1 (FHL1). The combination of TCA established the presence or absence of clonal hematopoiesis in about 90% of female subjects. We show that both genes are subject to X-chromosome inactivation and are polymorphic in all major US ethnic groups. The 5 TCAs were used to examine clonality in 46 female patients along with assays for erythropoietin-independent erythroid colonies (EECs) and granulocyte PRV-1 mRNA levels to discriminate polycythemias and thrombocytoses. Of these, all 19 patients with familial polycythemia or thrombocytosis had polyclonal hematopoiesis, whereas 22 of 26 patients with clinical evidence of myeloproliferative disorder and 1 patient with clinically obscure polycythemia were clonal. Interestingly, interferon alpha therapy in 2 patients with PV was associated with reversion of clonal to polyclonal hematopoiesis. EECs were observed in 14 of 14 patients with PV and 4 of 12 with ET, and increased granulocyte PRV-1 mRNA levels were found in 9 of 13 patients with PV and 2 of 12 with ET. Thus, these novel clonality assays are useful in the diagnosis and follow-up of polycythemic conditions and disorders with increased platelet levels.