複製能力のあるヘルペスシンプレックスウイルスベクターにおけるテトラサイクリン調節遺伝子発現

単純ヘルペスウイルス（HSV）ベクトルは、in vitroおよびin vivoの両方で遺伝子送達ベクターとして大きな可能性を秘めているように見えますが、そのようなベクター内の外来遺伝子の発現は簡単に調節することはできません。既知の真核生物調節システムのうち、テトラサイクリン誘導性遺伝子発現システムは、おそらくその誘導特性と、テトラサイクリン（TET）のよく知られている薬理学的特性とドキシサイクリンなどの類似体のために最も広く使用されています。ここでは、複製能力のあるHSVベクターで使用するためのTET誘導システムの適応について説明します。外来遺伝子発現のためのいくつかのタイプのTET誘導性プロモーターを含むHSVベクターが構築されました。これらのプロモーターには、最小サイトメガロウイルス（CMV）の即時エアリープロモーター、最小限のHSV ICP0プロモーター、またはHSV Taatgarat CIS-ear-ear-ear-early-everly-everly-emact-emact-emact-egulally Regulatoryを含む切り捨てられたHSV ICP0プロモーターにリンクされたテトラサイクリン応答要素（TRE）が含まれていました。要素（ここで、Rはプライムベースを表します）。TETトランスアクテベーターを発現するように設計された細胞株におけるマーカー遺伝子LACZの発現によって示されるように、3つのプロモーターコンストラクトはすべて、ドキシサイクリンによって適切に調節されました。ICP0プロモーターコンストラクトは、最高かつ最も持続的なレベルのLACZを発現しましたが、CMVプロモーターコンストラクトは誘導の相対レベルが最も高く、異なる用途での使用を示唆しています。TET制御HSVベクターの有用性を拡張するために、誘導性のLACZマーカー遺伝子に加えて誘導性TETトランク活性因子を共発現するベクトルが構築されました。この修飾により、特定の細胞株に限定されなかったテトラサイクリン誘導性遺伝子発現が生じ、このベクターは数日間不可逆的に分化したNT2細胞（NT神経）で誘導性の発現を可能にしました。最後に、修正されたTETトランクタイベーターを発現するHSVベクターが構築され、誘導特性が改善され、HSVベクター感染細胞における外来遺伝子発現の調節のためのTET調節システムの柔軟性が示されました。

Although herpes simplex virus (HSV) vectors appear to have great potential as gene delivery vectors both in vitro and in vivo, the expression of foreign genes in such vectors cannot be easily regulated. Of the known eukaryotic regulatory systems, the tetracycline-inducible gene expression system is perhaps the most widely used because of its induction characteristics and because of the well-known pharmacological properties of tetracycline (Tet) and analogs such as doxycycline. Here, we describe the adaptation of the Tet-inducible system for use in replication-incompetent HSV vectors. HSV vectors were constructed that contained several types of Tet-inducible promoters for foreign gene expression. These promoters contained a tetracycline response element (TRE) linked to either a minimal cytomegalovirus (CMV) immediate-early promoter, a minimal HSV ICP0 promoter, or a truncated HSV ICP0 promoter containing one copy of the HSV TAATGARAT cis-acting immediate-early regulatory element (where R represents a prime base). All three promoter constructs were regulated appropriately by doxycycline, as shown by the expression of the marker gene lacZ in cell lines engineered to express Tet transactivators. The ICP0 promoter constructs expressed the highest and most sustained levels of lacZ, but the CMV promoter construct had the highest relative level of induction, suggesting their use in different applications. To extend the utility of Tet-regulated HSV vectors, vectors were constructed that coexpressed an inducible Tet transactivator in addition to the inducible lacZ marker gene. This modification resulted in tetracycline-inducible gene expression that was not restricted to specific cell lines, and this vector was capable of inducible expression in irreversibly differentiated NT2 cells (NT-neurons) for several days. Finally, HSV vectors were constructed that expressed modified Tet transactivators, resulting in improved induction properties and indicating the flexibility of the Tet-regulated system for regulation of foreign gene expression in HSV vector-infected cells.