ハタのエピネフェロスタウヴィナから分離された新規ラナウイルスの特徴づけ

病気のハタのエピネフェロスタウヴィナから、大きなicosahedralウイルスが分離されました。このウイルスは、いくつかの培養魚細胞株でよく成長し、ハタの細胞株（GP）の連続継代の後、安定した感染性と高い感染性がありました。このウイルスは、酸性処理と熱処理の両方に敏感でした。ウイルスの複製は、DNA含有ゲノムを示す5-ヨード-2-デオキシウリジン（IUDR）によって阻害されました。ウイルスの感染性は、エーテル治療により減少し、ウイルスが脂質エンベロープであることを示唆しています。電子顕微鏡写真は、ウイルス感染GP細胞に豊富な細胞質イコサヘドラルウイルソンを示しました。細胞内ヌクレオカプシドのサイズは、反対側の間で154 nm、または内側の電子密度の高いコアが93 nmの反対側の頂点の間で176 nmでした。ウイルス粒子は、直径200 nmのサイズの原形質膜からの出芽によって放出されました。精製ウイルスのSDS-PAGEは、20の構造タンパク質バンドと49 kDaの主要なカプシドタンパク質（MCP）を明らかにしました。約500ヌクレオチドのDNAフラグメントは、ラナウイルスの種類であるカエルウイルス3（FV3）のMCP遺伝子の保存された領域のプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって成功裏に増幅されました。その後の複数のアライメントと系統解析により、新しく孤立したハタのウイルスがオオクチバスウイルス（LMBV）、FV3、およびレジーナラナウイルス（RRV）と密接に関連していることが示されました。私たちのデータは、ウイルス分離株がイリドヴィリダ科のラナウイルス属の新規メンバーであることを示唆しています。私たちは、ウイルスをシンガポールハタのイリドウイルス（SGIV）と暫定的に名前を付けます。SGIVは、ハタの炒め物の96％を殺すことができる深刻な全身性疾患を引き起こすことができました。

A large icosahedral virus was isolated from diseased grouper Epinephelus tauvina. The virus grew well in several cultured fish cell lines, with stable and high infectivity after serial passages in grouper cell line (GP). The virus was sensitive to both acid and heat treatments. Virus replication was inhibited by 5-iodo-2-deoxyuridine (IUDR), indicative of a DNA-containing genome. The virus infectivity was reduced with ether treatment, suggesting that the virus was lipid-enveloped. Electron micrographs showed abundant cytoplasmic icosahedral virons in the virus-infected GP cells. The size of the intracellular nucleocapsid was 154 nm between the opposite sides, or 176 nm between the opposite vertices with an inner electron-dense core of 93 nm. Virus particles were released through budding from plasma membranes with a size of 200 nm in diameter. SDS-PAGE of purified virus revealed 20 structural protein bands and a major capsid protein (MCP) of 49 kDa. A DNA fragment of approximately 500 nucleotides was successfully amplified by polymerase chain reaction (PCR) using the primers from conserved regions of the MCP gene of frog virus 3 (FV3), the type species of Ranavirus. Subsequent multiple alignment and phylogenetic analysis showed that the newly isolated grouper virus was closely related to largemouth bass virus (LMBV), FV3 and Regina ranavirus (RRV). Our data suggests that the virus isolate is a novel member of genus Ranavirus, family Iridoviridae. We tentatively name the virus as Singapore grouper iridovirus (SGIV). SGIV was able to cause serious systemic disease capable of killing 96% of grouper fry.