細胞骨格アクチンのC末端15 kDaフラグメントは、カスパーゼ媒介切断時に翻訳後N-ミリストイル化され、ミトコンドリアを標的としています

カスパーゼ基質の翻訳後N-ミリストイル化を検出するために、既知のカスパーゼ基質の新たに曝露したN末端のタンパク質N-ミリストイル化に対する感受性を検出することを、融合した細胞における融合した溶融細胞におけるin vivo代謝標識によって評価されました。その結果、細胞骨格骨格アクチンのカスパーゼ切断産物の新しく露出したN末端のN末端9残基がタンパク質N-ミリストイル化を効率的に指示することがわかった。COS-1細胞の代謝標識は、完全な長さの切り捨てられたアクチン（Tactin）のcDNAコードを一時的にトランスフェクトしました。アポトーシス誘導剤であるStaurosporineでフルレングスのアクチンを一時的にトランスフェクトしたCoS-1細胞を、N-ミリストイル化タクチンを生成したStaurosporineで処理した。マイトトラッカーまたは蛍光タグ付きファロイド染色と組み合わせた免疫蛍光染色により、細胞およびアクチンの形態に影響を与えることなくミトコンドリアと共局在するタクティンが外因的に発現したことが明らかになりました。まとめると、これらの結果は、細胞骨格アクチンのC末端15 kDa断片が、アポトーシス中にカスパーゼ媒介切断時に翻訳後N-ミリストイル化され、ミトコンドリアを標的とすることを示しています。

To detect the posttranslational N-myristoylation of caspase substrates, the susceptibility of the newly exposed N-terminus of known caspase substrates to protein N-myristoylation was evaluated by in vivo metabolic labeling with [(3)H]myristic acid in transfected cells using a fusion protein in which the query sequence was fused to a model protein. As a result, it was found that the N-terminal nine residues of the newly exposed N-terminus of the caspase-cleavage product of cytoskeletal actin efficiently direct the protein N-myristoylation. Metabolic labeling of COS-1 cells transiently transfected with cDNA coding for full-length truncated actin (tActin) revealed the efficient incorporation of [(3)H]myristic acid into this molecule. When COS-1 cells transiently transfected with cDNA coding for full-length actin were treated with staurosporine, an apoptosis-inducing agent, an N-myristoylated tActin was generated. Immunofluorescence staining coupled with MitoTracker or fluorescence tagged-phalloidin staining revealed that exogenously expressed tActin colocalized with mitochondria without affecting cellular and actin morphology. Taken together, these results demonstrate that the C-terminal 15 kDa fragment of cytoskeletal actin is posttranslationally N-myristoylated upon caspase-mediated cleavage during apoptosis and targeted to mitochondria.