基質としてアデノシン-3'-リン酸-5'-ホスフル酸を使用したアルカリホスファターゼの新規生物発光アッセイとルシフェリン - リン酸塩反応とその応用

このホワイトペーパーでは、ATP-スルファーラーゼとルシフェリン - ルシフェラーゼ反応を利用したアルカリホスファターゼ（ALP）の新規生物発光アッセイについて説明します。アッセイを管理する原則は次のとおりです。ALPの基質として機能するアデノシン-3'-リン酸-5'-ホスフル酸は、アデノシン-5'-ホスホ硫酸（APS）を生成するために酵素的に加水分解されます。APSは、ピロリン酸の存在下でATP-スルフリラーゼによってATPに変換されます。生成されたATPは、ルシフェリン - ルシフェラーゼ反応によって検出されます。測定可能な範囲は1 zmolから100 fmol/アッセイで、ブランク+3 SDでの検出限界は10 zmol/アッセイでした。変動係数（CV、n = 5）を標準曲線の各ポイントで調べました。平均CV率は4.47％でした（n = 6）。このアッセイシステムは、標識酵素としてALPを使用したベロトキシン遺伝子のヒト絨毛性ゴナドトロピンおよび対立遺伝子特異的PCR酵素結合免疫吸着アッセイの酵素免疫測定に適用されました。尿中の10（-2）MIU/ml HCGおよび5 pgの大腸菌O157 DNAは、提案された方法により直接的に高感度でアッセイできます。

This paper describes a novel bioluminescent assay of alkaline phosphatase (ALP) utilizing ATP-sulfurylase and the luciferin-luciferase reaction. The principle governing the assay is as follows. Adenosine-3'-phosphate-5'-phosphosulfate, which serves as the substrate for ALP, is hydrolyzed enzymatically to produce adenosine-5'-phosphosulfate (APS). APS is converted into ATP by ATP-sulfurylase in the presence of pyrophosphate. The ATP produced is detected by the luciferin-luciferase reaction. The measurable range was 1 zmol to 100 fmol/assay and the detection limit at blank+3 SD was 10 zmol/assay. The coefficient of variation (CV, n=5) was examined at each point of the standard curve; the mean CV percentage was 4.47% (n=6). This assay system was applied to enzyme immunoassay of human chorionic gonadotropin and allele-specific PCR enzyme-linked immunosorbent assay of verotoxin gene using ALP as the label enzyme; 10(-2) mIU/mL hCG in urine and 5 pg of Escherichia coli O157 DNA could be assayed directly and with high sensitivity by the proposed method.