変異体ジヒドロ葉酸レダクターゼ - チミジル酸シンターゼ融合遺伝子のマウスマロウ細胞へのレトロウイルス形質導入は、メトトレキサートと5-フルオロウラシルの両方に耐性をもたらします

化学療法に対する遺伝子導入ベースの骨髄保護戦略には、効果的な薬剤耐性遺伝子または遺伝子の組み合わせの開発が必要です。私たちの実験室は、それぞれメトトレキサート（MTX）および5-フルオロウラシル（5-FU）に対する骨髄保護のために、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（DHFR F/S）およびチミジル酸シンターゼ（TS G52S）の薬物耐性変異体を以前に生成しました。MTXと5-FUの両方に対する二重骨髄保護を授与する目的で、DHFR F/SとTS G52の両方を融合タンパク質（DHFR F/S-TS G52S）として、または重胞子からの個々のタンパク質としてコードする2つのレトロウイルスコンストラクトを生成しました。遺伝子。DHFR F/S-TS G52S融合タンパク質は機能的であり、個々の変異酵素のそれと同様の運動特性を示します。NIH 3T3細胞およびマウス骨髄前駆細胞は、融合DHFR F/S-TS G52S cDNAをレトロウイルスで導入しました。MTXと5-FUに対して同様のレベルの耐性を提供します。二層遺伝子の3 '末端からのf/s。MTXと5-FUは、乳がんや結腸癌などの疾患の併用療法で使用されるため、この融合遺伝子は、この薬物の組み合わせに関連する骨髄抑制毒性を減らすために診療所で役立つ可能性があります。

Gene transfer-based myeloprotection strategies against chemotherapy require the development of effective drug resistance genes or gene combinations. Our laboratory has previously generated drug-resistant mutants of dihydrofolate reductase (DHFR F/S) and thymidylate synthase (TS G52S) for myeloprotection against methotrexate (MTX) and 5-fluorouracil (5-FU), respectively. For the purpose of conferring dual myeloprotection against both MTX and 5-FU, we have generated two retroviral constructs encoding both DHFR F/S and TS G52S as a fusion protein (DHFR F/S-TS G52S) or as individual proteins from a bicistronic gene. The DHFR F/S-TS G52S fusion protein is functional and exhibits kinetic properties similar to that of the individual mutant enzymes. NIH 3T3 cells and mouse bone marrow progenitors retrovirally transduced with the fusion DHFR F/S-TS G52S cDNA provided similar levels of resistance to MTX and 5-FU as cells expressing the individual mutant enzymes and higher levels of resistance to MTX than cells expressing DHFR F/S from the 3' end of a bicistronic gene. As MTX and 5-FU are used in combination therapy for diseases such as breast and colon cancer, this fusion gene may be useful in the clinic to reduce myelosuppressive toxicity associated with this drug combination.