T細胞活性化、抗CD28抗体スーパーアゴニストのトポロジー的要件とシグナル伝達特性

ナイーブT細胞の完全な活性化には、T細胞抗原受容体の関与（TCR;シグナル1）とCD28による共刺激シグナル伝達の両方が必要です（シグナル2）。以前に、2種類のラットCD28特異的モノクローナル抗体（MABS）を特定しました。「従来の」TCRシグナル伝達依存性共刺激マブと、TCRライゲーションがない場合に一次安静時T細胞の完全な活性化を誘導することができる「超角角度MABS」vitroとin vivo。キメララット/マウスCD28分子を使用して、スーパーアゴニストは、CD28の免疫グロブリン様ドメインの横方向に露出したC "Dループにのみ結合することを示しますが、従来の共刺激MABは、天然CD80/CD86の結合部位に近いエピトープを認識します。リガンド。予期せず、ヒトCD28に対して上昇した新しい抗体のパネルのc dループ反応性は、それらの超原子特性に基づいて予測できます。さらに、マウスCD28分子は、スーパーアゴニズムMABと架橋すると、TCRリゲーションなしでラットまたはヒトC "Dループ配列を活性化するTCR細胞ハイブリドーマを発現させるように操作されました。最後に、生化学分析は、核因子因子カッパ経路を吸入リン酸塩を吸収することなく核因子カッパ経路を活性化することを明らかにしました。TCRZETAまたはZAP70のいずれかが、抗CD28のスーパーアゴニストのトポロジカルな相互作用が、T細胞活性化のシグナル1の要件をバイパスすることを示しています。

Full activation of naive T cells requires both engagement of the T cell antigen receptor (TCR; signal 1) and costimulatory signaling by CD28 (signal 2). We previously identified two types of rat CD28-specific monoclonal antibodies (mAbs): "conventional," TCR signaling-dependent costimulatory mAbs and "superagonistic" mAbs capable of inducing the full activation of primary resting T cells in the absence of TCR ligation both in vitro and in vivo. Using chimeric rat/mouse CD28 molecules, we show that the superagonists bind exclusively to the laterally exposed C"D loop of the immunoglobulin-like domain of CD28 whereas conventional, costimulatory mAbs recognize an epitope close to the binding site for the natural CD80/CD86 ligands. Unexpectedly, the C"D loop reactivity of a panel of new antibodies raised against human CD28 could be predicted solely on the basis of their superagonistic properties. Moreover, mouse CD28 molecules engineered to express the rat or human C"D loop sequences activated T cell hybridomas without TCR ligation when cross-linked by superagonistic mAbs. Finally, biochemical analysis revealed that superagonistic CD28 signaling activates the nuclear factor kappaB pathway without inducing phosphorylation of either TCRzeta or ZAP70. Our findings indicate that the topologically constrained interactions of anti-CD28 superagonists bypass the requirement for signal 1 in T cell activation. Antibodies with this property may prove useful for the development of T cell stimulatory drugs.