トランスフェリンの質量分析特性と、ジスルフィド結合の還元によって導出されるそれらの断片

質量分析、プロテオミクス、およびタンパク質化学方法は、ジスルフィド還元時に放出される新規C末端ポリペプチドを含む鉄触媒酸化によって誘導される79 kDaトランスフェリンタンパク質の切断産物を特徴付けるために使用されます。四重極の時間質量分光計で行われたさまざまな種（ヒト、ウシ、ウサギ、鶏）からの無傷のマルチチャージされたトランスフェリンのトップダウンエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析（ESI-MS/MS）b（n） - n末端領域から残基56-69の近くで発生する生物は、それらの相補的y（n）産です。ジチオトレイトール（DTT）やトリス（2-カルボキシエチル） - ホスフィン（TCEP）などの還元剤とのトランスフェリンのインキュベーションは、ESI-MSによって観察される複数の充電の増加と、ジスルフィドの減少と一致する分子量の増加をもたらします。ただし、哺乳類のトランスフェリンは、ジスルフィド還元時に6〜8 kDaの断片を放出します。タンパク質のアセチル化とMS/MSシーケンスは、断片がタンパク質のC末端に由来すること、および3つのジスルフィド結合を介して主要なトランスフェリン鎖に関連する別のポリペプチドであることを示しています。別のC末端鎖の存在は、タンパク質配列データベースで注釈されておらず、これまで文献では報告されていません。鉄触媒切断切断は、トランスフェリンのn末端とc末端の両方に由来する断片を誘導します。

Mass spectrometry, proteomics, and protein chemistry methods are used to characterize the cleavage products of 79 kDa transferrin proteins induced by iron-catalyzed oxidation, including a novel C-terminal polypeptide released upon disulfide reduction. Top-down electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) of intact multiply-charged transferrin from a variety of species (human, bovine, rabbit, chicken) performed on a quadrupole time-of-flight mass spectrometer yields multiply-charged b(n)-products originating near residues 56-69 from the N-terminal region, in addition to their complementary y(n)-products. Incubation of transferrin with reductants, such as dithiothreitol (DTT) or tris(2-carboxyethyl)-phosphine (TCEP), yields an increase in multiple charging observed by ESI-MS and an increase in molecular weight consistent with disulfide reduction. However, mammalian transferrins release a 6-8 kDa fragment upon disulfide reduction. Protein acetylation and MS/MS sequencing demonstrate that the fragment originates from the C-terminus of the protein, and that it is a separate polypeptide linked via three disulfide bonds to the main transferrin chain. The existence of a separate C-terminal chain is not annotated in protein sequence databases and, to date, has not been reported in the literature. Iron-catalyzed cleavage induces fragments originating from both the N- and C-terminus of transferrin.