タバコプロトプラストにおける一時的な形質転換の効率は、プラスミド量とは無関係です

ポリエチレン - グリコール（PEG）によって媒介されるタバコプロトプラストの過渡形質転換のための最適化されたプロトコルについて説明します。予想どおり、PcamVGUSによって駆動される定量的ベータ - グルクロニダーゼ（GUS）活性は、使用されるプラスミドの量に依存していました。それにもかかわらず、免疫検出方法により、変換効率は使用されるプラスミドの量に依存するのではなく、細胞能力によって課される制限に依存することを実証します。実際、広範囲のプラスミド濃度（テストあたり0.1〜10マイクログ）を使用して、同じ割合の形質転換細胞（約60％）を取得しました。最後に、それぞれが0.1〜10マイクログの範囲の濃度で混合物に2つのプラスミドタイプを使用した場合、すべての形質転換された細胞が両方のプラスミドによってコードされるタンパク質を発現したことを示します。一時的な発現と同時変換の実験は日常的に使用されている方法であり、おそらくこの研究の主要な結果はこの分野の多くの研究者によって想定されていましたが、データは実験的にこの仮定をサポートしています。

We describe an optimized protocol for the transient transformation of tobacco protoplasts mediated by polyethylene-glycol (PEG). As expected, the quantitative beta-glucuronidase (Gus) activity driven by pCaMVGus was dependent on the amount of plasmid used. Nevertheless, we demonstrate by an immunodetection method that transformation efficiency did not depend on the amount of plasmid used but on the limitation imposed by cell competence. In fact, we obtained the same percentage of transformed cells (about 60%) using a wide range of plasmid concentrations (0.1-10 microg per test). Finally, we show that, when we used two plasmid types in a mixture at a concentration ranging from 0.1 to 10 microg for each, all transformed cells expressed proteins encoded by both plasmids. Transient expression and co-transformation experiments are routinely used methods and, probably, the major results from this work were assumed by many researchers in this field, but our data experimentally support this assumption.