等電力焦点の後のリボヌクレアーゼを検出するためのザイモグラム方法：ヒト、ウシ、および微生物酵素の複数の形態の分析

ポリアクリルアミドゲル（IEF-PAGE）の薄層での等電気焦点を組み合わせた、in situリボヌクレアーゼ（RNase）活性を検出するためのザイモグラム方法が開発されました。基質RNA、臭化エチジウム、および適切な反応緩衝液を含む乾燥アガロース膜とインキュベートした後、集中ゲルの上部にしっかりと配置され、蛍光背景のRNaseイソザイムに対応するシャープで明確なダークバンドが紫色の光の下に現れました。4.8 mの最終濃度でのIEF-PAGEゲルに尿素を添加して、RNaseの最適焦点を許可しました。この方法には、0.1 ng未満の精製RNase A Aの高感度だけでなく、免疫染色法と比較して高いバンド解像度もありました。また、ウシ膵臓RNaseと哺乳類酵素としての2種類のヒト尿RNaseを含む精製酵素の分析、および微生物酵素としてのRNase T1およびT2を含む、および粗い組織抽出物に存在するRNaseの検出にも役立ち、より多くの粗い組織抽出物に存在します。これらの酵素の多様性の詳細な解明。

A zymogram method for detection of in situ ribonuclease (RNase) activity, combined with isoelectric focusing in a thin layer of polyacrylamide gel (IEF-PAGE), has been developed. After incubation with a dried agarose film containing substrate RNA, ethidium bromide, and an appropriate reaction buffer, which was placed tightly on the top of the focused gel, sharp and distinct dark bands corresponding to RNase isoenzymes on a fluorescent background appeared under uv light. Addition of urea to the IEF-PAGE gel at a final concentration of 4.8 M permitted optimal focusing of the RNases. This method had not only a high sensitivity of less than 0.1 ng purified RNase A, but also a high band resolution compared with the immunostaining method. It was also useful for analysis of purified enzymes, including bovine pancreatic RNases and two types of human urine RNase as mammalian enzymes, and RNases T1 and T2 as microbial enzymes, as well as for detection of RNases present in crude tissue extracts, resulting in more detailed elucidation of the multiplicity of these enzymes.