Aequorea EGFPと比較したDSREDのdsredの高い安定性

類似したベータcan foldを示すが、異なるオリゴマー組織とクロモフォア構造を備えた2つの広く使用されている遺伝子レポーター、EGFPとDSRED、タンパク質の比較分析を実施しました。高温やカオトロピック剤グアニジン塩酸塩など、in vitroでのタンパク質の安定性に影響を与える2つの要因が研究されました。プロテアソームベースの分解に対する蛍光タンパク質のin vivo耐性は、昆虫および哺乳類の細胞、およびアフリカツメガエル胚で研究されました。熱およびGDMCl誘導の変性の見かけの速度定数は、EGFPよりもDSREDの方が数桁低かった。dsredの寿命は、EGFPの寿命よりも数倍長く、培養細胞および胚で観察されました。研究されたすべての条件下でのDSREDの顕著な蛍光安定性は、その四量体組織にとってかなりの程度に起因しています。したがって、DSREDは、有意に拡張された細胞内寿命を持つ遺伝子レポーターおよび高度な集団マーカーとして使用できます。

Comparative analysis of conformational stabilities was performed for two widely used genetic reporters, EGFP and DsRed, proteins exhibiting similar beta-can folds, but possessing different oligomeric organization and chromophore structures. Two factors affecting protein stability in vitro, such as elevated temperatures and a chaotropic agent guanidine hydrochloride, were studied. In vivo tolerance of the fluorescence proteins to proteasomal-based degradation was studied in insect and mammalian cells, and in Xenopus embryos. The apparent rate constants of thermal and GdmCl-induced denaturation were several orders of magnitude lower for DsRed than for EGFP. DsRed lifetimes severalfold longer than those of EGFP were observed in cultured cells and in embryos. The remarkable fluorescence stability of DsRed under the all conditions that have been studied is attributed to a significant extent to its tetrameric organization. Therefore, DsRed can be used as a genetic reporter and advanced population marker with a significantly extended intracellular lifespan.