アセチル - コエンザイム-aカンジダリポリティカのカルボキシラーゼ1酵素の精製と特性

アセチルコエンザイム-Aカルボキシラーゼは、カンジダリポリティカから均一な形で分離されています。酵素調製の均一性は、分析的な超遠心分離、ドデシル - 硫酸塩 - ポリアクリルアミドゲル電気泳動、およびオウチターロニー二重拡散分析によって証明されます。精製された酵素は、25度Cで8.0 U/mgタンパク質の特定の活性を示し、1 molビオチン/263000 Gタンパク質を含んでいます。酵素の沈降係数（S20、W）は18 Sです。それは、酵素が230000の分子量を持つ1種類のサブユニットしか所有していないことを示すことが示されています。内容は、C。lipolytica酵素が高度に統合されたサブユニット構造を持っていることを示しています。C. lipolytica酵素は非常に不安定ですが、グリセロールによって安定化されています。酵素はポリ（エチレングリコール）によって著しく活性化され、その活性化は主に基質のKM値の減少によるものです。この活性化因子の存在下でさえ、C。lipolytica酵素のアセチルCoAのKM値は、Saccharomyces cerevisiaeおよび動物組織の酵素のkm値よりもはるかに高い。C. lipolytica酵素は、動物組織の酵素とは異なり、クエン酸によって活性化されていません。

Acetyl-coenzyme-A carboxylase has been isolated in homogeneous form from Candida lipolytica. The homogeneity of the enzyme preparation is evidenced by analytical ultracentrifugation, dodecyl-sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Ouchterlony double-diffusion analysis. The purified enzyme exhibits a specific activity of 8.0 U/mg protein at 25 degrees C and contains 1 mol biotin/263000 g protein. The sedimentation coefficient (S20,W) of the enzyme is 18 S. It has been shown by dodecyl-sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis that the enzyme possesses only one kind of subunit with a molecular weight of 230000. This finding, together with the biotin content, indicates that the C. lipolytica enzyme has a highly integrated subunit structure. The C. lipolytica enzyme is very labile, but is stabilized by glycerol. The enzyme is markedly activated by poly(ethyleneglycol), the activation being due principally to a decrease in the Km values for substrates. Even in the presence of this activator, the Km value for acetyl-CoA of the C. lipolytica enzyme is much higher than that of the enzyme from Saccharomyces cerevisiae and animal tissues. The C. lipolytica enzyme, unlike the enzyme from animal tissues, is not activated by citrate.