RIN3：初期のエンドサイトーシス経路に関与する両親媒性IIと相互作用する新規RAB5 GEF

アクティブ（GTPバウンド）と非アクティブ（GDPバウンド）状態の間を循環する小さなGTPase RAB5は、初期のエンドサイトーシス経路での膜出芽および人身売買において重要な役割を果たします。ただし、RAB5規制プロセスの根底にある分子メカニズムは、初期エンドソームへのターゲティングイベント以外に完全には理解されていません。ここでは、他のRINメンバーと追加のプロリッチドメインと共有される多くの機能的ドメインを含む、新しいRAB5結合タンパク質RIN3を報告します。RIN3は、GTP-RAB5の刺激装置および安定剤であるRIN2と同じ生化学的特性を表示します。さらに、RIN3は独自の細胞内局在を示します。細胞質小胞に局在したHeLa細胞で発現したRin3およびRin3陽性小胞にはRab5が含まれていたが、初期エンドソームマーカーEEA1は含まれていなかった。トランスフェリンは、RIN3陽性小胞を介して初期エンドソームに部分的に輸送されているように見えました。RIN3は、SH3ドメインを含み、受容体を介したエンドサイトーシスに関与する両親hisISIN IIとの豊富なドメインを介して相互作用することもできました。興味深いことに、細胞質両親媒性IIは、RIN3と共発現すると、RIN3およびRAB5陽性小胞に移行しました。これらの結果は、GTP-RAB5の刺激装置および安定剤として生化学的に特徴付けられたRIN3が、原形質膜から初期エンドソームまでの輸送経路で重要な役割を果たすことを示しています。

The small GTPase Rab5, which cycles between active (GTP-bound) and inactive (GDP-bound) states, plays essential roles in membrane budding and trafficking in the early endocytic pathway. However, the molecular mechanisms underlying the Rab5-regulated processes are not fully understood other than the targeting event to early endosomes. Here, we report a novel Rab5-binding protein, RIN3, that contains many functional domains shared with other RIN members and additional Pro-rich domains. RIN3 displays the same biochemical properties as RIN2, the stimulator and stabilizer of GTP-Rab5. In addition, RIN3 exhibits its unique intracellular localization. RIN3 expressed in HeLa cells localized to cytoplasmic vesicles and the RIN3-positive vesicles contained Rab5 but not the early endosomal marker EEA1. Transferrin appeared to be transported partly through the RIN3-positive vesicles to early endosomes. RIN3 was also capable of interacting via its Pro-rich domain with amphiphysin II, which contains SH3 domain and participates in receptor-mediated endocytosis. Interestingly, cytoplasmic amphiphysin II was translocated into the RIN3- and Rab5-positive vesicles when co-expressed with RIN3. These results indicate that RIN3 biochemically characterized as the stimulator and stabilizer for GTP-Rab5 plays an important role in the transport pathway from plasma membrane to early endosomes.