膜貫通ヘリカルセグメントではなく、不変リジンは、単純ヘルペスウイルス2型リボヌクレオチド還元酵素（ICP10）の大きなサブユニットのキナーゼ活性に必要です

単純ヘルペスウイルス2型リボヌクレオチドレダクターゼ（ICP10）の大きなサブユニットは、アミノ末端で、シグナルペプチドと膜貫通（TM）ヘリカルセグメントの特徴を備えたSer/Thrプロテインキナーゼ（PK）のキメラで構成され、リボヌクレオチドレダクターゼのカルボキシ末端で（Chung et al。、1989、1990）。ICP10の膜免疫蛍光化細胞は、TMの上流または下流に位置する合成ペプチドに対する抗体を含む細胞を形質転換します。これは、ICP10が膜誘導タンパク質であることを示しています。ICP10-PKをさらに特徴付けるために、部位指向および削除変異体を使用しました。触媒モチーフIまたは触媒モチーフIIにおける不変LysのGly106の変異、および両方のモチーフ（アミノ酸106-178）の欠失はキナーゼ活性を排除しませんでした。PK活性は、細菌で発現した不変LYS変異体によって保持され、ドデシル硫酸 - ポリアクリルアミドゲル電気泳動によるタンパク質分離後、膜フィルターへの移動によって保持されました。ICP10と不変LYS変異体の両方が、ATPアフィニティアナログである14C標識rho-fluorosulfonylbenzoyl 5'-アデノシンを結合しました。欠失変異体は、ICP10-PKよりも4倍低いキナーゼ活性を有しており、Mn2+には鈍感であり、これらのモチーフがキナーゼ活性のMN2+活性化に関与していることを示唆しています。PK活性は、TMセグメントの削除によって失われました（アミノ酸残基85-106）。

The large subunit of herpes simplex virus type 2 ribonucleotide reductase (ICP10) is a chimera consisting, at the amino terminus, of a Ser/Thr protein kinase (PK) with features of a signal peptide and a transmembrane (TM) helical segment, and at the carboxy-terminus, of the ribonucleotide reductase (Chung et al., 1989, 1990). Membrane immunofluorescence of ICP10 transformed cells with antibodies to synthetic peptides located upstream or downstream of the TM indicates that ICP10 is a membrane-spanning protein. Site-directed and deletion mutants were used to further characterize ICP10-PK. Mutation of Gly106 in catalytic motif I or of the invariant Lys in catalytic motif II, and deletion of both motifs (amino acids 106-178) did not eliminate kinase activity. PK activity was retained by the invariant Lys mutant expressed in bacteria and following protein separation by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and transfer to membrane filters. Both ICP10 and the invariant Lys mutant bound 14C-labeled rho-fluorosulfonylbenzoyl 5'-adenosine, an ATP affinity analog. The deletion mutant had 4-fold lower kinase activity than ICP10-PK, and it was insensitive to Mn2+, suggesting that these motifs are involved in Mn2+ activation of kinase activity. PK activity was lost by deletion of the TM segment (amino acid residues 85-106).