単純ヘルペスウイルス1型の主要なキャプシドタンパク質遺伝子のトランス活性化には、細胞転写因子が必要です

この調査の目的は、主要なカプシドタンパク質（VP5を使用して単純ヘルペスウイルスタイプ1（HSV-1）のベータガンマ（漏れや層またはガンマ1）の遺伝子の転写活性化に関与する調節要素を特定して特性化することでした。またはICP5）モデルとしての遺伝子。非感染および感染したHELA細胞からの核抽出物を使用したゲル移動性シフトアッセイにより、VP5プロモーターを含む2つの主要なタンパク質DNA複合体を特定することができました。これらの2つの複合体の移動度は変化しないままであり、感染した細胞核抽出物を使用した場合、ユニークな複合体は観察されませんでした。DNase IおよびOrthophenanthroline -Cu+フットプリント分析により、2つの複合体には、VP5 CAPサイトと比較して-64〜 -75 bpの間にある単一の結合部位GGCCATCTTGAAが含まれていることが明らかになりました。VP5遺伝子活性化におけるこの漏出層結合部位（LBS）の機能を決定するために、シス結合クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子の一時的な発現を使用して、この領域の変異の効果をテストしました。上記の配列の削除は、HSV-1を伴う上層またはHSV-1の即時生成遺伝子の共輸送により、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のトランス活性化レベルの7〜8倍の減少をもたらしました。これらの結果から、LBS配列と細胞因子がVP5遺伝子のトランス活性化に関与していると結論付けます。公開された遺伝子配列の検索により、LBSに関連する配列は、他の多くのHSV-1、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、および細胞プロモーターに存在することが明らかになりました。結合部位の配列相同性と未発表の競争結合研究の結果は、この漏れやすい層の結合因子が、YY1または共通因子-1と呼ばれるユビキタスな細胞転写因子に関連している、または同じであることを示唆しています（NF-E1としても知られています、デルタ、およびucrbp）。

The purpose of this investigation was to identify and characterize the regulatory elements involved in the transcriptional activation of the beta gamma (leaky-late or gamma 1) genes of herpes simplex virus type 1 (HSV-1) by using the major capsid protein (VP5 or ICP5) gene as model. Gel mobility shift assays with nuclear extracts from uninfected and infected HeLa cells enabled us to identify two major protein-DNA complexes involving the VP5 promoter. The mobilities of these two complexes remained unaltered, and no unique complexes were observed when infected cell nuclear extracts were used. DNase I and orthophenanthroline-Cu+ footprint analyses revealed that the two complexes involve a single binding site, GGCCATCTTGAA, located between -64 and -75 bp relative to the VP5 cap site. To determine the function of this leaky-late binding site (LBS) in VP5 gene activation, we tested the effect of mutations in this region by using transient expression of a cis-linked chloramphenicol acetyltransferase gene. Deletion of the above sequence resulted in a seven- to eightfold reduction in the level of transactivation of the chloramphenicol acetyltransferase gene by superinfection with HSV-1 or by cotransfection of HSV-1 immediate-early genes. From these results, we conclude that the LBS sequence and a cellular factor(s) are involved in the transactivation of the VP5 gene. A search of published gene sequences revealed that sequences related to the LBS exist in a number of other HSV-1, cytomegalovirus, retrovirus, and cellular promoters. Sequence homologies of binding sites and results of unpublished competition binding studies suggest that this leaky-late binding factor may be related to, or the same as, a ubiquitous cellular transcriptional factor called YY1 or common factor-1 (also known as NF-E1, delta, and UCRBP).