ヒトGluおよびLys-プラスミノゲンとプラスミンのアフィニティクロマトグラフィー型の分離と特性評価

アフィニティクロマトグラフィー型、1および2は、それぞれ、エプシロン - アミノカプロ酸の線形勾配を持つL-リジン置換セファロース柱からの勾配溶出により、それぞれヒトGluおよびLys-プラスミノゲンから分離されました。2つのZymogenフォームのそれぞれには2つのアフィニティクロマトグラフィー形式が含まれていますが、各Zymogen調製物のこれらの形態の相対的な濃縮は、Zymogenの調製に使用される血漿サンプルまたは濃縮血漿画分に依存していました。特異的な分析アクリルアミドゲル電気泳動システムは、Zymogenおよび酵素形態の特性評価に使用され、その成分親和性クロマトグラフィー型、1および2。1-プラスミノーゲン、およびLys-2-plasmingoenは、分子サイズに明確な段階的な違いを示し、充電。Glu-1-formは分子サイズが最大で最も酸性であり、Lys-2-formは分子サイズで最も小さく、最も基本的なものです。タンパク質分解的に変化したLys-1およびLys-2型は、Zymogen Affinity Chromatographyの形態が等電気形式の異なる分布を示したことを特異的にdfであるように見えます。6.2、6.3、6.4、および6.6のPI値を持つグループラスミノーゲンから分離された主要な等電気形態、および6.7、7.2、7.5、7.8、および8.1のPI値を持つLys-Plasminogenから分離された主要な等電線形（Summaria、L.、Arzadon、L.、Bernabe、P.、Robbins、K。C.、およびBarlow、G。H.（1973）J。Biol。gluおよび溶解型のシアル酸の含有量は似ているように見えますが、分離されたアフィニティクロマトグラフィー形式は明確な違いを示しています。Glu-1およびLys-1形態のシアル酸の含有量は同一であり、互いに同一のGlu-2およびLys-2型のシアル酸の含有量よりも実質的に高くなっています。Zymogen-1-および-2-2-2型の電荷の違いは、そのシアル酸含有量の違いに関連している可能性があります。プラスミン阻害剤であるトラシロールの存在下でウロキナーゼによって活性化されると、4つのZymogen Affinity Chromatographyがそれぞれ、明らかにユニークで異なる酵素型に変換されました。4つの酵素形式は、分子サイズの明確な段階的な違いを示しています。Glu-1-プラスミンはサイズが最大ですが、Lys-2-プラスミンのサイズは最小です。各プラスミン由来のカルボキシメチルヘビー（A）鎖は分子サイズで異なることがわかりましたが、4つの酵素型のそれぞれに見られる2つのカルボキシメチル（B）鎖は同一で同じ分子サイズであると思われました。4つの重い（a）チェーンは、分子サイズの段階的な違いを示しています。Glu-1-Heavy（A）チェーンのサイズは最大ですが、Lys-2が多い（a）チェーンのサイズは最小です...

Affinity chromatography forms, 1 and 2, were each isolated from human Glu- and Lys-plasminogens by gradient elution from a L-lysine-substituted Sepharose column with a linear gradient of epsilon-aminocaproic acid. Although each of the two zymogen forms contains two affinity chromatography forms, the relative concentrattions of these forms in each of the zymogen preparations depended upon the plasma sample or enriched plasma fraction used for the preparation of the zymogen. Specific analytical acrylamide gel electrophoretic systems were used for the characterization of the zymogen and enzyme forms, and their component affinity chromatography forms, 1 and 2. The four zymogen affinity chromatography forms, Glu-1-plasminogen, Glu-2-plasminogen, Lys-1-plasminogen, and Lys-2-plasmingoen, show distinct stepwise differences in their molecular size and charge. The Glu-1-form is the largest in molecular size and the most acidic, and the Lys-2-form is the smallest in molecular size and the most basic. The proteolytically altered Lys-1- and Lys-2- forms appear to be specifically df the zymogen affinity chromatography forms showed a different distribution of isoelectric forms. The major isoelectric forms isolated from Glu-plasminogen with pI values of 6.2, 6.3, 6.4, and 6.6, and the major isoelectric forms isolated from Lys-plasminogen with pI values of 6.7, 7.2, 7.5, 7.8, and 8.1, (Summaria, L., Arzadon, L., Bernabe, P., Robbins, K. C., and Barlow, G. H. (1973) J. Biol. Chem. 248, 2984-2991) were shown to be mixtures of the Glu-1- and Glu-2- forms, or the Lys-1- and Lys-2- forms, respectively. Although the sialic acid contents of the Glu- and Lys- forms appear to be similar, the isolated affinity chromatography forms show distinct differences. The sialic acid contents of the Glu-1- and Lys-1- forms are identical, and are substantially higher than the sialic acid contents of the Glu-2- and Lys-2- forms which are also identical to each other. It is possible that the charge difference between the zymogen-1- and -2- forms may be related to the differences in their sialic acid content. Each of the four zymogen affinity chromatography forms, when activated by urokinase in the presence of the plasmin inhibitor, Trasylol, was converted to an apparently unique and different enzyme form. The four enzyme forms show distinct stepwise differences in molecular size; Glu-1-plasmin is the largest in size whereas Lys-2-plasmin is the smallest in size. Each plasmin-derived carboxymethyl heavy(A) chain was found to be different in molecular size, but the two carboxymethyl light(B) chains found in each of the four enzyme forms appeared to be identical and of the same molecular sizes. The four heavy(A) chains show a stepwise difference in molecular size; the Glu-1-heavy(A) chain is the largest in size whereas the Lys-2-heavy(A) chain is the smallest in size...