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MCF-10A細胞は、自発的に不死化されていない変換されていないヒト乳腺上皮細胞株です。私たちは以前、ヒトのポイント変化したC-Ha-Rasプロトオノコゲン、ラットC-NEU（C-ERBB-2）プロトオンコゲン、またはヒト変換成長因子α-alpha（TGF-alpha）の過剰発現を以前に示しました。MCF-10A細胞の遺伝子は、そのような細胞のin vitro形質転換につながります。これらの2つの遺伝子をMCF-10Aヒト乳腺上皮細胞に導入すると、完全に腫瘍形成性表現型が誘導されるかどうかを確認するために、MCF-10A HA-RASおよびMCF-10A TGF-α細胞にヒトC-を含む組換えレトロウイルスベクターに感染しました。ERBB-2プロトオノコゲンと吸湿性遺伝子。10 MCF-10A TGF-ALPHA/C-ERBB-2（MCF-10A TE）および10 MCF-10A HA-RAS/C-ERBB-2（MCF-10A HE）吸湿性クローンがランダムに選択され、細胞に拡張されました線。MCF-10A TEおよびMCF-10A彼のクローンは、親の非感染細胞と比較してP185 ERBB-2タンパク質レベルの10倍から40倍の増加を発現しました。これらの細胞は、血清を含まない培地の成長率の4倍の増加を示し、MCF-10A細胞と比較して、外因性表皮成長因子またはTGF-αに対するマイトジェン反応が大幅に減少したことを示しました。さらに、MCF-10A TEとMCF-10Aの両方のクローンは、MCF-10A HA-RA、MCF-10A C-ERBB-2、またはMCF-10A TGF-Alphaよりも軟寒天で20倍から20倍高いクローニング効率を示しました。クローン。しかし、MCF-10A TEもMCF-10Aも、ヌードマウスに注入されたときにin vivoで腫瘍として成長することができませんでした。これらの結果は、C-Ha-Ras、C-ERBB-2、およびTGF-alpha遺伝子が、不死化ヒト乳腺上皮細胞株のin vitro形質転換に加法効果があるが、他のProtoの活性化などの追加の遺伝的変化があることを示唆しています。 - 完全に腫瘍形成的表現型を誘発するためには、腫瘍抑制遺伝子の不活性化が必要になる場合があります。
MCF-10A細胞は、自発的に不死化されていない変換されていないヒト乳腺上皮細胞株です。私たちは以前、ヒトのポイント変化したC-Ha-Rasプロトオノコゲン、ラットC-NEU（C-ERBB-2）プロトオンコゲン、またはヒト変換成長因子α-alpha（TGF-alpha）の過剰発現を以前に示しました。MCF-10A細胞の遺伝子は、そのような細胞のin vitro形質転換につながります。これらの2つの遺伝子をMCF-10Aヒト乳腺上皮細胞に導入すると、完全に腫瘍形成性表現型が誘導されるかどうかを確認するために、MCF-10A HA-RASおよびMCF-10A TGF-α細胞にヒトC-を含む組換えレトロウイルスベクターに感染しました。ERBB-2プロトオノコゲンと吸湿性遺伝子。10 MCF-10A TGF-ALPHA/C-ERBB-2（MCF-10A TE）および10 MCF-10A HA-RAS/C-ERBB-2（MCF-10A HE）吸湿性クローンがランダムに選択され、細胞に拡張されました線。MCF-10A TEおよびMCF-10A彼のクローンは、親の非感染細胞と比較してP185 ERBB-2タンパク質レベルの10倍から40倍の増加を発現しました。これらの細胞は、血清を含まない培地の成長率の4倍の増加を示し、MCF-10A細胞と比較して、外因性表皮成長因子またはTGF-αに対するマイトジェン反応が大幅に減少したことを示しました。さらに、MCF-10A TEとMCF-10Aの両方のクローンは、MCF-10A HA-RA、MCF-10A C-ERBB-2、またはMCF-10A TGF-Alphaよりも軟寒天で20倍から20倍高いクローニング効率を示しました。クローン。しかし、MCF-10A TEもMCF-10Aも、ヌードマウスに注入されたときにin vivoで腫瘍として成長することができませんでした。これらの結果は、C-Ha-Ras、C-ERBB-2、およびTGF-alpha遺伝子が、不死化ヒト乳腺上皮細胞株のin vitro形質転換に加法効果があるが、他のProtoの活性化などの追加の遺伝的変化があることを示唆しています。 - 完全に腫瘍形成的表現型を誘発するためには、腫瘍抑制遺伝子の不活性化が必要になる場合があります。
MCF-10A cells are a spontaneously immortalized untransformed human mammary epithelial cell line. We have previously shown that overexpression of a human point-mutated c-Ha-ras proto-oncogene, the rat c-neu (c-erbB-2) proto-oncogene, or the human transforming growth factor-alpha (TGF-alpha) gene in MCF-10A cells leads to in vitro transformation of such cells. To ascertain whether the introduction of two of these genes into MCF-10A human mammary epithelial cells induces a completely tumorigenic phenotype, we infected MCF-10A Ha-ras and MCF-10A TGF-alpha cells with a recombinant retroviral vector containing the human c-erbB-2 proto-oncogene and the hygromycin-resistance gene. Ten MCF-10A TGF-alpha/c-erbB-2 (MCF-10A TE) and 10 MCF-10A Ha-ras/c-erbB-2 (MCF-10A HE) hygromycin-resistant clones were randomly selected and expanded into cell lines. MCF-10A TE and MCF-10A HE clones expressed a 10-fold to 40-fold increase in p185 erbB-2 protein levels compared with parental uninfected cells. These cells exhibited a fourfold increase in their growth rate in serum-free medium and showed a strongly reduced mitogenic response to exogenous epidermal growth factor or TGF-alpha compared with MCF-10A cells. Moreover, both MCF-10A TE and MCF-10A HE clones exhibited a fivefold to 20-fold higher cloning efficiency in soft agar than MCF-10A Ha-ras, MCF-10A c-erbB-2, or MCF-10A TGF-alpha clones. However, neither MCF-10A TE nor MCF-10A HE cells were able to grow as tumors in vivo when they were injected into nude mice. These results suggest that c-Ha-ras, c-erbB-2, and TGF-alpha genes have an additive effect on the in vitro transformation of an immortalized human mammary epithelial cell line, but that additional genetic changes such as activation of other proto-oncogenes or inactivation of a tumor suppressor gene may be necessary to elicit a fully tumorigenic phenotype.
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