アスペルギルスoryzaeの相同変換システムを使用したタカ - アミラーゼA遺伝子プロモーターの削除分析

アスペルギルスオリザエのタカアミラーゼA遺伝子（AMYB）は、澱粉またはマルトースによって誘導されます。誘導の分子メカニズムは、AMYBプロモーターとベータ - グルクロニダーゼ（GUS）をコードする大腸菌UIDA遺伝子の融合を使用して調査されました。AMYBプロモーター内の高レベルの発現と調節の原因となる領域を特定するために、一連の削除プロモーターが構築され、A。oryzaeMet Locusに相同組換えによって導入されました。-377から-290の間の領域の削除（数値は、翻訳開始点（+1）から欠失エンドポイントまでの塩基対の距離を示しています）がGUS活性の大幅に減少しましたが、GUS活性のわずかな減少が観察されました。-377までの削除で。ノーザンブロット分析により、GUS活性の低下はGUS遺伝子の発現レベルに依存することが示されました。-377〜 -290の間の領域は、AMYB遺伝子の高レベルの発現と調節に必要な配列を直接含めることが示唆されています。

The Taka-amylase A gene (amyB) of Aspergillus oryzae is induced by starch or maltose. The molecular mechanism of the induction was investigated using a fusion of the amyB promoter and the Escherichia coli uidA gene encoding beta-glucuronidase (GUS). To identify the region responsible for high-level expression and regulation within the amyB promoter, a series of deletion promoters was constructed and introduced into the A. oryzae met locus by homologous recombination. Deletion of the region between -377 to -290 (the number indicates the distance in base pairs from the translation initiation point (+1) to the deletion end point) significantly reduced of the GUS activity, but slight reduction of the GUS activity was observed in deletions up to -377. Northern blot analysis showed that reduction of the GUS activity depended upon the expression level of the GUS gene. The region between -377 to -290 is suggested to include the sequence required directly for high-level expression and regulation of the amyB gene.