ヒトアルファ1-ミクログロブリン/ビクニン遺伝子の転写制御配列におけるクラスター化された肝臓特異的元素で作られた強力なエンハンサー

アルファ1-ミクログロブリン（A1M）およびビクニンは、遊離分子として、およびA1MのIgA重鎖またはビクニンのアルファ間阻害剤ファミリーのH1、H2、およびH3重鎖のいずれかを持つ複合体の両方として存在する血漿タンパク質です。成熟したA1Mとビクニンは、肝臓特異的発現を持つ単一の遺伝子から合成されたA1M/ビクニン前駆体（ABP）の切断に由来します。ヒトABP遺伝子の5'フランク領域の5つのキロベースが配列決定されました。この領域の欠失変異体は、CATレポーター遺伝子の上流にサブクローン化され、HEPG2肝腫細胞にトランスフェクトされました。ABP遺伝子の完全な活性には、-2.7-から-2.8 kbの領域をカバーするセグメントが必要です。このセグメントには、6つの要素（ボックス1〜6、5 'から3'）のクラスターが含まれています。これらのクラスターは、肝臓が豊富なトランス作動因子の潜在的な結合部位であり、HNF-1、HNF-4、HNF-3、HNF-1、それぞれHNF-3、およびHNF-4。このクラスターは、HEPG2細胞の位置および距離に依存しない方法で、異種最小プロモーターの活性を高めます。このエンハンサーの活性は、クラスターが中国のハムスター卵巣（CHO）またはHELA細胞のプロモーターを活性化できないため、肝臓細胞に限定されています。バンドシフト実験により、肝臓が濃縮された転写因子HNF-1（HNF-3）がそれぞれボックス1および4または3に結合することが示されました。弱いプロモーターと強い離れた肝臓特異的エンハンサーの組み合わせは、肝細胞で発現する他のほとんどの血漿タンパク質遺伝子とABP遺伝子を区別します。

alpha 1-Microglobulin (A1M) and bikunin are plasma proteins which are present both as free molecules and as complexes with either IgA heavy chains for A1M or the H1, H2, and H3 heavy chains of the inter-alpha-inhibitor family for bikunin. Mature A1M and bikunin originate from the cleavage of an A1M/bikunin precursor (ABP) synthesized from a single gene with liver-specific expression. Five kilobases of the 5'-flanking region of the human ABP gene were sequenced. Deletion mutants of this region subcloned upstream of a CAT reporter gene were transfected into HepG2 hepatoma cells. A segment covering the -2.7- to -2.8-kb area is required for full activity of the ABP gene. This segment contains a cluster of six elements (boxes 1-6, 5' to 3') which are potential binding sites for the liver-enriched trans-acting factors HNF-1, HNF-4, HNF-3, HNF-1, HNF-3, and HNF-4, respectively. This cluster enhances the activity of heterologous minimal promoters in a position- and distance-independent fashion in HepG2 cells. This enhancer activity is restricted to liver cells as the cluster is unable to activate promoters in Chinese hamster ovary (CHO) or HeLa cells. By band-shift experiments we have shown that the liver-enriched transcription factors HNF-1, or HNF-3, do bind to boxes 1 and 4, or 3, respectively. The combination of a weak promoter and a strong distant and liver-specific enhancer distinguishes the ABP gene from most other plasma protein genes expressed in hepatocytes.